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申请/专利权人:毕昇(北京)生物科技有限公司
摘要:本发明属于生物技术领域,公开了一种基于尖孢镰刀菌CoB基因的I型内含子的构建体及其构建方法、RNA环化方法、环状RNA和应用。本发明提供的用于RNA体外环化的构建体是以来源于尖孢镰刀菌Fusariumoxysporumcob基因上的I型内含子作为介导RNA体外环化的子剪切核酶,且至少保留I型内含子的P1结构域,在引入少量外显子片段或不引入外显子片段的情况下即能够实现对RNA的体外环化,且所得环状RNA中所残留的外源序列低至5nt,有效地解决了现有体外合成环化RNA中残留外源序列大所带来的免疫反应的问题,具有良好的应用前景。
主权项:1.一种用于RNA体外环化的构建体,其特征在于,所述构建体沿着5’-3’的方向依次包括:3’-内含子、外显子2、待环化基因、外显子1和5’-内含子;其中,所述3’-内含子和5’-内含子来源于核苷酸序列如SEQIDNO:1所示的尖孢镰刀菌Fusariumoxysporumcob基因的I型内含子,且所述5’-内含子包括P1结构域,所述P1结构域包括序列如SEQIDNO:38所示的核苷酸片段;所述外显子1为I型内含子5’端的紧邻外显子片段,所述外显子1的长度为0~393nt;所述外显子2为I型内含子3’端的紧邻外显子片段,所述外显子2的长度为0~780nt。
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