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申请/专利权人：北京石油化工学院
摘要：本发明公开了一种基于NF‑κB细胞信号通路的皮肤炎症细胞模型及其应用，属于细胞模型应用技术领域。该方法是选择了HaCaT细胞人永生化角质形成细胞建模，利用基因工程技术将荧光素酶报告基因与NF‑κB转录因子元件编辑融合，转入HaCaT细胞，构建HaCaT‑NF‑κB‑LUC稳转细胞模型，该模型即可通过荧光素酶报告基因方法评价NF‑κB‑LUC水平，从而低成本、快速、高通量地筛选检测大量药物和天然产物在皮肤细胞中抗炎活性。该基于NF‑κB细胞信号通路的皮肤炎症细胞模型使用慢病毒稳定转染HaCaT细胞获得过表达NF‑κB细胞株，同时携带LUC报告基因，方便检测NF‑κB通路的激活情况。
主权项：1.一种基于NF-κB细胞信号通路的皮肤炎症细胞模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、利用pLv表达载体构建NF-κB-LUC慢病毒稳转质粒质粒，其中，所述NF-κB-LUC的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；S2、pLv-NF-κB-LUC慢病毒包装质粒获得：将所述S1中获得的慢病毒稳转质粒pLv-NF-κB-LUC利用大肠杆菌转化、无内毒素质粒提取后，获得慢病毒包装质粒pLv-NF-κB-LUC；S3、HaCaT-NF-κB-LUC稳转细胞株病毒模型的获得：1使用离体的人胚肾细胞制造慢病毒，待细胞密度达到80％，留作备用；2磷酸钙转染混合体系的配置：将pLv-NF-κB-LUC质粒、慢病毒包装质粒和2.5M氯化钙混合，加去离子水至500μL，逐滴加入2×缓冲液混合制备成转染混合液；3HaCaT-NF-κB-LUC稳转细胞株病毒模型的获得：将所述转染混合液加入到含有慢病毒细胞的培养皿中，并与37℃下置于质量分数为5％的二氧化碳保温箱中培养，待转染混合液加入到慢病毒细胞中开始计时，48h后收集培养上清液，上清液经离心、膜过滤、分装后，得到HaCaT-NF-κB-LUC稳转细胞株病毒模型。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 北京石油化工学院 一种基于NF-κB细胞信号通路的皮肤炎症细胞模型及其应用
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