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一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法 

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申请/专利权人:中国人民解放军西部战区总医院

摘要:本发明公开了一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法,能够通过一步法消化的方式从小鼠胆囊组织中分离获取小鼠胆囊MSCs,该方法全程在超净工作台内完成,获取胆囊组织后,将胆囊组织放入EP管中剪成小块,HBSS洗两次;弃去上清,加入1.5ml溶液I,用剪刀把胆囊组织剪碎,37℃水浴10分钟;4℃,300g离心5分钟;再次弃上清,加入1.5ml胰酶重悬沉淀后,37℃水浴60分钟,每隔10分钟摇晃一次;4℃,300g离心5分钟;弃去上清,用含10%FBS的DMEM高糖培养基重悬后,移到12孔板中,置于37℃的CO2培养箱中培养过夜。

主权项:1.一种从小鼠胆囊中分离获取间充质干细胞的方法,其特征在于:包括下述步骤:1)操作前处理及麻醉;2)将小鼠固定,打开小鼠腹部,获取胆囊组织;3)将胆囊组织放入1.5-3ml的EP管中剪成小块,HBSS洗2-3次;4)弃去步骤3)中的上清,加入1.5-3ml溶液I,用剪刀把胆囊组织剪碎,37-40℃水浴10-15分钟;所述溶液I为EBSS10mMEGTA1%HEPEs;5)经步骤4)后,0-4℃,300-500g离心5-10分钟;6)再次弃上清,加入1.5-3ml的0.05%TrypsinEDTA100ugmlDNaseI重悬沉淀后,37-40℃水浴60-80分钟;7)经步骤6)后,0-4℃,300-500g离心5-10分钟;8)经步骤7)后,弃去上清,用含10%FBS的DMEM高糖培养基重悬后,移到12孔板中,置于37℃的CO2培养箱中培养过夜。

全文数据:

权利要求:

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