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申请/专利权人：江苏省家禽科学研究所;广东骏威农业有限公司

摘要：本发明公开了一种高效靶向鸡去甲基化酶基因FTO的siRNA及优化方法，包括步骤一，siRNA制备；步骤二，纯化；步骤三，体外退火；步骤四，验证与纯化；步骤五，储存；步骤六，提取鸡FTO基因，步骤七，转染细胞；本发明通过调控FTO基因的表达，可以控制鸡的脂肪沉积和代谢，进而培育出具有优良肉质、更高生长速度和更低脂肪含量的鸡种，实现对动物性状的改良；遗传育种方法基于基因调控技术，相比传统的育种方法具有更高的效率和精准度，遗传育种方法可以快速筛选出具有目标性状的个体，大幅缩短了育种周期，通过直接针对目标基因进行调控，遗传育种方法可以更准确地实现对性状的改良，避免了传统育种方法中可能出现的不可预测性。

主权项：1.一种靶向鸡去甲基化酶基因FTO的siRNA，包括步骤一，siRNA制备；步骤二，纯化；步骤三，体外退火；步骤四，验证与纯化；步骤五，储存；步骤六，提取鸡FTO基因，步骤七，转染细胞；其特征在于：其中上述步骤一中，利用先进的DNARNA合成仪分别合成长度为21个核苷酸的正义链和反义链，正义链序列：5'CAAGAGGAACAUUGGAAUA3'SEQNO.1反义链序列：5'UAUUCCAAUGUUCCUCUUG3'SEQNO.2，确保合成的RNA序列的准确性和纯度，通过高效液相色谱HPLC方法进行纯化；其中上述步骤二中，将含有醋酸钾、醋酸镁和Hepes-KOH的退火缓冲液与合成的正义链和反义链RNA分子混合，混合液加热至90℃进行变性，然后逐渐降温至37℃进行温育，时间控制在1小时，使两条链退火形成双链siRNA分子；其中上述步骤三中，通过琼脂糖凝胶电泳方法验证双链siRNA的形成和纯度；其中上述步骤四中，将纯化的siRNA分子保存在适当的缓冲液中，并储存于-20℃备用；上述步骤五中，使用无菌水或RNAase-free的水将siRNA稀释，浓度为100nmolL，在无菌的离心管中，首先加入适当体积的无血清培养基，然后加入所需量的siRNA溶液；轻轻混合溶液，确保siRNA均匀分散在培养基中；在另一个无菌的离心管中，加入相同体积的无血清培养基，然后加入适当量的Lipofectamine2000转染试剂，轻轻混合溶液；将含有Lipofectamine2000的核酸转染试剂滴加到含有siRNA的溶液中，轻轻混合，避免剧烈震荡；室温下孵育混合液5分钟，以便形成siRNA-核酸转染试剂复合物。

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