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一种条件性KRAS-G12C突变动物模型的构建方法 

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申请/专利权人:江苏集萃药康生物科技股份有限公司

摘要:本发明公开了一种条件性KRAS‑G12C突变动物模型的构建方法,基于Cre‑loxP重组酶技术设计打靶序列,利用两对不同的且序列方向相反的loxp位点,依次为loxpA、loxpB、loxpC、loxpD,其中loxpA和loxpC配对,loxpB和loxpD配对,在loxpA、loxpB之间具有与被替换KRAS基因或包含目的突变位点的片段相同的序列,在loxpB、loxpC之间具有带有突变位点G12C的被替换序列的反向序列,构建条件性KRAS‑G12C突变动物模型,当动物模型与表达cre动物配繁或者在动物模型中引入cre蛋白时,带有突变位点的KRAS基因发生表达。

主权项:1.一种条件性KRAS-G12C突变动物模型的构建方法,其特征在于基于Cre-loxP重组酶技术设计打靶序列,利用基因编辑技术将打靶序列替换KRAS基因序列或包含目的突变位点的片段,构建条件性KRAS-G12C突变动物模型,所述打靶序列包括两对不同的loxp位点,依次为loxpA、loxpB、loxpC、loxpD,其中loxpA和loxpC配对且序列方向相反,loxpB和loxpD配对且序列方向相反,在loxpA、loxpB之间具有与被替换序列相同的序列,在loxpB、loxpC之间具有带有突变位点G12C的被替换序列的反向序列,当动物模型与表达cre动物配繁或者在动物模型中引入cre蛋白时,loxpA、loxpC位点位点之间的序列发生翻转倒置,接着loxpB、loxpD位点之间的序列发生剪切删除;或者loxpB、loxpD位点之间的序列发生翻转倒置,接着loxpA、loxpC位点之间的序列发生剪切删除,带有突变位点的KRAS基因发生表达。

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