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申请/专利权人：湖南玉新药业有限公司
摘要：本发明公开了一种倍他米松中间体脱氢物的微生物制备方法，以化合物Ⅰ或化合物Ⅱ为底物，底物经过水析、微粉碎和高温消毒预处理后投入诺卡氏菌或简单节杆菌发酵液中进行C1,2位脱氢转化后精制，对应得化合物Ⅲ或化合物Ⅳ，相对底物重量收率为91％‑96％，纯度大于97.0％，副产物很少。此发酵工艺操作简单，收率高，环境友好，所用底物是以价格便宜的9‑羟基雄烯二酮合成而来，在倍它米松合成路线的前段发酵脱氢，有利于倍他米松产品质量的提高，也大大降低了倍他米松生产成本。
主权项：1.一种倍他米松中间体脱氢物的微生物制备方法，其特征在于，利用单一菌种脱氢一次性转化，具体包括以下步骤：1菌种的培养：在斜面培养基上划线接种菌种，培养结束后接种于种子液培养基中进行种子液培养，培养一段时间后取样检测C1,2脱氢酶活性以及镜检无菌合格后备用；2无菌发酵液的配制：在消毒釜中加入发酵液，然后121-123℃高压蒸汽灭菌20min，降温到28-32℃，得到无菌发酵液；3发酵液种子培养：将步骤1得到的菌液接种至步骤2得到的无菌发酵液中培养8-15h检测酶活和无菌，合格后备用；4底物的投放：向步骤3得到的发酵液中投入化合物Ⅰ或化合物Ⅱ，然后投入助溶剂，控制空气流量，保持发酵罐内压力0.02-0.06MPa、发酵温度25-32℃连续发酵20-24h后每隔8-12h取样HPLC分析，待转化率大于95％后终止转化；5提取精制：调节发酵液PH值至2.0-3.0，升温到70-90℃保温1h灭活菌种后过滤，滤饼用10-20倍重量的三氯甲烷反复提取至菌渣中无料，浓缩提取液，然后用体积比石油醚：乙酸乙酯＝2:1-4:1的混合溶剂打浆精制，过滤烘干即得白色或类白色晶体产物化合物Ⅲ或化合物Ⅳ，产品纯度大于97.0％；其中，所述的化合物Ⅰ、化合物Ⅱ、化合物Ⅲ和化合物Ⅳ的结构和转化关系如下：
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