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申请/专利权人：成都美溢德生物技术有限公司

摘要：本发明公开了一种适用于水产动物的体外蛋白消化率的检测方法，涉及鱼类特性研究领域。通过提取有胃鱼和无胃鱼活体内各消化吸收器官的消化酶液，并通过模拟有胃鱼的胃部和肠道及无胃鱼的肠道的消化过程建立起分别适用于有胃鱼和无胃鱼的体外蛋白消化率检测方法；该方法的检测结果可以较为准确地反应不同饲料或蛋白原料进入鱼体内的消化吸收情况，可以为鱼类的相关特性研究和水产饲料配方的设计提供更好的指导。

主权项：1.一种适用于有胃鱼的体外蛋白消化率的检测方法，其特征在于，所述方法步骤包括：S1.1：提取有胃鱼消化酶液：解剖获取有胃鱼的消化道，剔除肠系膜，用pH值为2.2的柠檬酸缓冲液冲洗胃，并擦干多余水分后，添加pH值为2.2的缓冲液，以8000rpm高速匀浆10分钟，以10000rpm的转速进行离心15分钟，获取有胃鱼的胃部酶液；用pH值为7.4的磷酸缓冲液冲洗肠道，并擦干多余水分后，添加pH值为7.4的缓冲液，以8000rpm高速匀浆10分钟，以10000rpm离心15分钟，获得有胃鱼的肠道酶液；S1.2：胃消化酶的消化过程操作：称取待测蛋白原料，倒入50ml离心管中，加入pH值为2.2的柠檬酸缓冲液，用6molL的盐酸溶液调节pH值至2.2-2.4范围内，加入经步骤S1.1制取的有胃鱼的胃部酶液进行混合，盖紧盖子后于温度恒定为35℃，转速为230rpm的摇床震荡16小时；S1.3：肠消化酶的消化过程操作：用10molL的NaOH溶液将经步骤S1.2获取的消化液调节pH值至7.3-7.5内，加入pH值为7.4的磷酸缓冲液，加入经步骤S1.1制取的有胃鱼肠道酶液进行混合，密封后置于温度恒定为35℃中，转速设置为230rpm的摇床中震荡6小时；S1.4：消化液的固液分离：将经步骤S1.3处理后的消化液置于4000rpm离心8分钟后，去除上清液，在离心管中加入去离子水，搅拌后转移恒重的滤纸上进行抽滤，并用去离子水冲洗离心管，直至沉积物全部转移至滤纸上，继续抽滤至无明显液体残留；S1.5：将经步骤S1.4处理的残渣和滤纸一并放入温度为105℃的烘箱中干燥4小时，冷却后，称取残渣和滤纸总重量；将滤渣从滤纸上刮下，然后测定粗蛋白含量；按消化率=[1-（c1-b1）×d1样品重量×a1]×100%计算获取待测原料的有胃鱼体外蛋白消化率；其中，a1为步骤S1.2的待测蛋白原料的粗蛋白含量；b2为步骤S1.4中滤纸的重量；c1为步骤S1.5中残渣和滤纸的总重量；d1为步骤S1.5中滤渣粗蛋白的含量。

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