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申请/专利权人：浙江三誉生物科技有限公司
摘要：本发明涉及生物工程技术领域，且公开了一种便于细胞活性复苏的细胞长期冻存的冻存液及应用，包含如下组分：20‑40％基础培养基、1‑6％二甲基亚砜、3‑8％胎牛血清、10‑30％抗冻组合物、余量为缓冲液。抗冻组合物：将壳聚糖进行氧化，壳聚糖上的两个羟基分别氧化成醛基和羰基，壳聚糖上的氨基和原儿茶酸上的羟基进行接枝，得到壳聚糖醛酮接枝原儿茶酸；高锰酸钾、甘氨酸分别与两个羟基反应，得到壳聚糖羧酸接枝原儿茶酸；壳聚糖羧酸接枝原儿茶酸与锰离子进行配位反应，形成络合物；再与香豆素、抗冻蛋白、甘油混合得到抗冻组合物。本产品能够有效保持冻存细胞的存活率，便于细胞活性复苏，对细胞复苏后的增殖能力具有良好的效果。
主权项：1.一种便于细胞活性复苏的细胞长期冻存的冻存液，其特征在于：所述冻存液包含如下组分：20-40％基础培养基、1-6％二甲基亚砜、3-8％胎牛血清、10-30％抗冻组合物、余量为缓冲液；所述抗冻组合物的制备方法如下：1将壳聚糖加入5-15％醋酸溶液中浸泡，搅拌8-16h，加入过氧化氢搅拌30-60min，加入催化剂氧化铜，60-100℃密闭反应2-8h，减压蒸馏，干燥，得到壳聚糖醛酮；2将壳聚糖醛酮加入质量分数6-12％冰醋酸溶液中，加热至50-65℃，加入原儿茶酸溶液，搅拌均匀，加入引发剂过硫酸铵，升温至80-90℃反应1.5-5h，冷却至室温得到壳聚糖醛酮接枝原儿茶酸；3向壳聚糖醛酮接枝原儿茶酸中，加入高锰酸钾、甘氨酸，搅拌20-100min，80-160℃反应30-80h，得到壳聚糖羧酸接枝原儿茶酸；4将四水氯化锰加入水中，搅拌至溶解，用盐酸调pH至1-2，再将四水氯化锰溶液，在搅拌下逐滴加入壳聚糖羧酸接枝原儿茶酸中，并调pH至4-6，过滤并充分洗涤，真空干燥10-20h，重结晶得到锰离子-壳聚糖羧酸-丙烯络合物；5将锰离子-壳聚糖羧酸-丙烯络合物、香豆素、抗冻蛋白加入甘油中，搅拌至均匀，得到抗冻组合物。
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权利要求：
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