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申请/专利权人：赵锦祥
摘要：本发明公开了一种基于PCR的多色荧光通道检测方法及应用，属于基因检测技术领域。该方法通过在PCR反应体系中添加热稳定的RNaseHII核糖核酸内切酶及掺杂了RNA碱基和LNA碱基的荧光探针，该荧光探针可以兼容多色荧光通道；同时，PCR反应体系中的特异性引物在5’端引入与荧光探针序列相同的TAG，并在TAG和特异性引物序列间插入碱基bridge序列，形成特异性长引物，特异性长引物与特异性短引物的结合能够使荧光探针可以在不需要和特异性引物延伸链竞争的前提下和互补链结合，提高荧光探针的退火效率。本发明利用RNaseHII核糖核酸内切酶对探针进行酶切，使探针两端偶联的荧光基团和淬灭基团彻底远离，发出强荧光信号，具有成本低、特异性高、多色通道、信号强的优点。
主权项：1.一种基于PCR的多色荧光通道检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：提取待测样品的全基因组DNA；S2：将步骤S1中提取的DNA作为模板，在同步双酶PCR反应体系中进行同步双酶PCR反应；其中，同步双酶PCR反应体系包括DNA模板5-50ng，特异性引物400-800nM，通用反向引物400-800nM，荧光探针100-200nM，RNaseHII酶25-50mU，PCRMix1×，其它体积用水补足；S3：将步骤S2中的反应产物置于激发光下，读取不同荧光信号，完成检测。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 赵锦祥 一种基于PCR的多色荧光通道检测方法及应用
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