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申请/专利权人：吉林大学
摘要：本发明涉及生物标记技术领域，具体公开了一种基于串联型iLOV蛋白标记贾第虫的方法，其中含有谷氨酸脱氢酶启动子驱动的新霉素抗性基因表达框、MCS多克隆位点、Ran启动子驱动下的串联型iLOV荧光蛋白表达框。通过电转染及G418的筛选，获得可以稳定表达串联型iLOV蛋白的贾第虫重组株，通过激光共聚焦观察串联型iLOV蛋白表达情况，利用流式细胞仪检测阳性筛选效率及平均荧光强度。结果显示成功获得可以稳定表达串联型iLOV蛋白的贾第虫重组株,其阳性筛选效率为53.1％，平均荧光强度约为未转染组的13倍。
主权项：1.一种基于串联型iLOV蛋白标记贾第虫的方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤1、基因串联：将三个绿色荧光蛋白iLOV基因串联形成重组iLOV-V3基因；步骤2、构建稳定表达质粒：将所述重组iLOV-V3基因插入原核表达载体，并置于贾第虫内源性启动子元件下，同时插入抗性基因表达框，构建用于稳定表达绿色荧光蛋白iLOV-V3的重组质粒；步骤3、贾第虫滋养体电穿孔：利用电转杯，将所述的重组质粒电穿孔进入处于对数生长期的贾第虫滋养体获得能够表达串联型荧光蛋白iLOV-V3的贾第虫虫株；步骤4、药筛分选：将药物加入培养基中，用于筛选能够稳定表达串联型荧光蛋白iLOV-V3的贾第虫虫株；步骤5、荧光观察：收集经药筛分选后的贾第虫虫株，在激光共聚焦下观察荧光蛋白表达情况；步骤6、基因组验证：收集经药筛分选后的贾第虫虫株，提取药筛分选后的iLOV-V3贾第虫虫株基因组DNA及cDNA，通过PCR技术，鉴定串联型荧光蛋白iLOV-V3在虫体内的表达情况；步骤7、流式分析阳性筛选效率：收集经药筛分选后的贾第虫虫株，通过流式细胞仪，检测其阳性筛选效率及平均荧光强度。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 吉林大学 一种基于串联型iLOV蛋白标记贾第虫的方法
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