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申请/专利权人：中国农业科学院农产品加工研究所

摘要：本发明公开了一种肉制品中晚期糖基化终末产物和杂环胺同时定量检测方法，包括：步骤一，配制标准溶液并绘制标准曲线；步骤二，肉制品前处理；步骤三，取标准品和前处理好的样品进行UPLC‑MSMS定量分析。本发明采用同种前处理方式，同种仪器检测参数，在较短时间内同时更好地保留并定量分析肉制品中晚期糖基化终末产物和杂环胺，检测方法灵敏度高，检测效率提升，检测成本降低，适用于肉制品中晚期糖基化终末产物和杂环胺的同时痕量分析。

主权项：1.肉制品中晚期糖基化终末产物和杂环胺同时定量检测方法，其特征在于，包括：步骤一，配制标准溶液并绘制标准曲线：采用有机溶剂分别溶解晚期糖基化终末产物和杂环胺及其内标物质，配制各个标准品工作液，梯度稀释为多个浓度的混合标准溶液，进行UPLC-MSMS定量分析，绘制晚期糖基化终末产物和杂环胺的标准曲线；步骤二，肉制品前处理：将肉制品绞碎，脱脂沉淀蛋白，加入还原剂低温过夜还原，加入酸高温酸水解，水解液抽滤、定容，加入晚期糖基化终末产物和杂环胺的混合内标，先后用甲醇和0.1molL盐酸溶液活化和平衡固相萃取柱，上样，再用0.1molL盐酸溶液和甲醇依次淋洗，用2mL95%氨化甲醇（vv）洗脱，收集洗脱液，氮吹，1mL甲醇复溶，混匀，过有机系滤膜；步骤三，UPLC-MSMS定量分析：根据标准曲线，样品峰面积及内标物峰面积计算晚期糖基化终末产物和杂环胺的浓度；晚期糖基化终末产物包括CML，CEL，杂环胺包括Harman，Norharman，MeIQ，IQ，8-MeIQx，4,8-DiMeIQx，7,8-DiMeIQx，IQx，PhIP，晚期糖基化终末产物的内标物包括d4-CML、d4-CEL，杂环胺的内标物包括4,7,8-TriMeIQx；色谱条件：色谱柱为ACQUITYUPLCHSST32.1mm×100mm，1.8µm；进样体积为2µL；流动相A为0.1%甲酸水，流动相B为甲醇；梯度洗脱程序为0～0.5min，95％A；0.5～2min，85％A；2～3min，80％A，3～4min，60％A，4～5min，40％A，5～6min，10％A，6～7min，0％A，7～7.1min，95％A，7.1～8min，95％A；质谱条件：离子源为ESI+；扫描模式为动态多反应监测，雾化器气体为氮气；干燥气温度为280℃；干燥气流量：12Lmin；雾化器压力，25Psi；毛细管电压为3500V；CML的母、子离子对的质荷比定性为205.2→130.1，定量为205.2→84.0，碎裂电压为55V，碰撞能量定性为12eV，定量为20eV，保留时间为1.206±0.5min；CEL的母、子离子对的质荷比定性为219.1→130.3，定量为219.1→84.1，碎裂电压为80V，碰撞能量定性为12eV，定量为20eV，保留时间为1.239±0.5min；Harman的母、子离子对的质荷比定性为183.1→89.1，定量为183.1→115.2，碎裂电压为55V，碰撞能量为40eV，保留时间为6.496±0.5min；Norharman的母、子离子对的质荷比定性为169.1→89.1，定量为169.1→115.1，碎裂电压为55V，碰撞能量为40eV，保留时间为6.287±0.5min；MeIQ的母、子离子对的质荷比定性为213.1→145.2，定量为213.1→198.1，碎裂电压为85V，碰撞能量定性为28eV，定量为32eV，保留时间为5.362±0.5min；IQ的母、子离子对的质荷比定性为199.1→131.1，定量为199.1→184.1，碎裂电压为60V，碰撞能量定性为24eV，定量为32eV，保留时间为4.994±0.5min；8-MeIQx的母、子离子对的质荷比定性为214.1→173.2，定量为214.1→131.1，碎裂电压为100V，碰撞能量定性为24eV，定量为40eV，保留时间为6.032±0.5min；IQx的母、子离子对的质荷比定性为200.1→132.1，定量为200.1→185.1，碎裂电压为103V，碰撞能量定性为40eV，定量为32eV，保留时间为5.552±0.5min；4,8-DiMeIQx的母、子离子对的质荷比定性为228.1→187.1，定量为228.1→213.1，碎裂电压为128V，碰撞能量定性为28eV，定量为32eV，保留时间为6.358±0.5min；7,8-DiMeIQx的母、子离子对的质荷比定性为228.1→187.2，定量为228.1→131.1，碎裂电压为100V，碰撞能量定性为32eV，定量为40eV，保留时间为6.366±0.5min；PhIP的母、子离子对的质荷比定性为225.1→140.1，定量为225.1→210.1，碎裂电压为90V，碰撞能量定性为40eV，定量为32eV，保留时间为6.687±0.5min；d4-CML的母、子离子对的质荷比定性为209.1→134.0，定量为209.1→87.8，碎裂电压为70V，碰撞能量定性为10eV，定量为20eV，保留时间为1.206±0.5min；d4-CEL的母、子离子对的质荷比定性为223.0→134，定量为223.0→88.0，碎裂电压为70V，碰撞能量定性为12eV，定量为28eV，保留时间为1.239±0.5min；4,7,8-TriMeIQx的母、子离子对的质荷比定性为242.1→201.2，定量为242.1→145.1，碎裂电压为100V，碰撞能量定性为32eV，定量为40eV，保留时间为6.63±0.5min。

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百度查询： 中国农业科学院农产品加工研究所 肉制品中晚期糖基化终末产物和杂环胺的同时定量检测方法