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申请/专利权人:世代生物公司
摘要:本文提供了用于产生DNA载体的方法,所述方法包括在至少具有DNA结合和DNA切口产生功能的仅单个种类的Rep蛋白存在的情况下在有效条件下将携带所述载体多核苷酸的细胞群温育足以诱导所述DNA在所述细胞内产生的时间,所述载体多核苷酸对操作性地定位于第一AAV反向末端重复DNA多核苷酸序列与第二AAV反向末端重复DNA多核苷酸序列ITR之间的异源核酸进行编码,其中所述ITR中的至少一个ITR具有对应于AAV野生型ITR的核苷酸序列;以及从所述细胞中采集和分离具有所述ITR的所得DNA。
主权项:1.一种从载体多核苷酸获得的DNA载体,其中所述载体多核苷酸对定位于第一ITR与第二ITR之间的核酸序列进行编码,其中所述第一ITR和所述第二ITR中的至少一个ITR包括对应于Rep蛋白结合位点的核酸序列,以在单个种类的Rep蛋白存在的情况下诱导所述DNA载体在细胞中复制,所述Rep蛋白至少具有DNA结合和DNA切口产生功能,其中所述单个种类的Rep蛋白是AAVRep78蛋白或AAVRep68蛋白,其中所述DNA载体是具有共价封闭端的非病毒无衣壳双链DNA载体(ceDNA载体),所述DNA载体通过包括以下步骤的方法获得:a.在所述单个种类的Rep蛋白存在的情况下在有效条件下将携带所述载体多核苷酸的细胞群温育足以诱导所述DNA载体在所述细胞内产生的时间,所述细胞群缺乏病毒衣壳编码序列,其中所述细胞不包括病毒衣壳编码序列,其中不存在其它种类的Rep蛋白,并且其中所述细胞不与对第二Rep蛋白进行编码的核酸序列接触;以及b.从所述细胞中采集和分离所得DNA载体。
全文数据:
权利要求:
百度查询: 世代生物公司 封闭端DNA(CEDNA)产生中对REP蛋白活性的调节
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