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申请/专利权人:广州市第一人民医院(广州消化疾病中心、广州医科大学附属市一人民医院、华南理工大学附属第二医院)
摘要:本发明属于溃疡性结肠炎治疗领域,提供了一种地锦草来源细胞外囊泡在制备防治溃疡性结肠炎药物中的应用,包括地锦草来源细胞外囊泡的提取制备和地锦草来源的细胞外囊泡对小鼠溃疡性结肠炎的防治作用研究,具体步骤如下:步骤一,地锦草的叶细胞提取:选新鲜、健康的地锦草叶片作为实验材料并剪碎,将剪碎后的样本加入酶解液中,确保样本与酶解液充分接触并孵育,期间轻柔地翻转或搅拌以促进酶解过程,从而分离出叶细胞;步骤二,地锦草的叶细胞培养:将地锦草的叶细胞置于培养基内部培养;本发明证实了地锦草来源细胞外囊泡可以用于治疗溃疡性结肠炎,为临床防治IBD的新药物开发提供实验基础,具有较好的应用前景。
主权项:1.一种地锦草来源细胞外囊泡在制备防治溃疡性结肠炎药物中的应用,其特征在于,包括:地锦草来源细胞外囊泡的提取制备和地锦草来源的细胞外囊泡对小鼠溃疡性结肠炎的防治作用研究,具体步骤如下:步骤一,地锦草的叶细胞提取:选新鲜、健康的地锦草叶片作为实验材料并剪碎,将剪碎后的样本加入酶解液中,确保样本与酶解液充分接触并孵育,期间轻柔地翻转或搅拌以促进酶解过程,从而分离出叶细胞;步骤二,地锦草的叶细胞培养:将地锦草的叶细胞置于培养基内部培养,使得叶细胞正常生长和繁殖并分泌细胞外囊泡;步骤三,细胞外囊泡的分离和纯化:叶细胞在培养过程中会分泌细胞外囊泡,通过超速离心的方式将细胞外囊泡分离纯化,然后对细胞外囊泡表征,以确定其大小、形态、表面标记物的特征;步骤四,收集提取细胞外囊泡液,放置于-20℃冰箱保存待用;步骤五,小鼠分组及给药:将18只6-8周龄C57BL6小鼠随机分为三组,每组6只,分别为:空白组Control、DSS组3%DSS水和DSS+地锦草来源的细胞外囊泡组DSS+EHH-ExoNPs,空白组小鼠自由饮用饮用水,其余两组小鼠饮用水中添加3%wwDSS,自由饮用7天,地锦草来源的细胞外囊泡的浓度调整为10mgml,在DSS造模期间于干预组连续灌胃干预7天,灌胃量200ul只;DSS组用等量磷酸缓冲盐溶液phosphatebuffersaline,PBS灌胃;步骤六,在整个实验中,每天监测三组小鼠体重、粪便特征和体力活动并计算疾病活动指数DAI评分,整理出数据进行对比,在第7天,使用CO2吸入对小鼠实施安乐死,收集结肠和直肠组织,并测量结肠长度用于进一步实验。
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