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摘要：本发明涉及肿瘤原代细胞培养技术领域，具体公开了一种泌尿系肿瘤原代细胞的培养方法，包括：S1、组织样本采集和处理，S2、组织消化和细胞分离，S3、细胞收集和培养，S4、基因编辑和功能研究，S5、3D培养模型的建立，S6、单细胞分析和细胞异质性研究以及S7、培养和传代；本发明使用胶原蛋白涂层培养瓶和适应的培养基配方，有助于维持泌尿系肿瘤原代细胞的健康状态，保证其在培养过程中的稳定性和可重复性；通过低氧培养条件，模拟肿瘤组织内的低氧环境，促进细胞的生长和适应性，使得培养的细胞更符合实际肿瘤微环境的特征，建立3D球体模型有助于更真实地模拟肿瘤组织的结构和生长方式，提供更准确的药物筛选平台和生物学行为评估。
主权项：1.一种泌尿系肿瘤原代细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、组织样本采集和处理，从手术中获取泌尿系肿瘤组织，将组织放入含冷PBS的无菌容器中，并迅速送至实验室；S2、组织消化和细胞分离，在生物安全柜中，将组织转移到新的无菌培养皿中，用冷PBS清洗去除血液和碎片；将组织剪成1～2mm3体积的块状，加入消化液，37℃，60～100rpm条件下，搅拌1～2小时，在搅拌的最后15分钟加入Trypsin-EDTA进行细胞解离；S3、细胞收集和培养，将消化液过滤，用RPMI-1640培养基中和，离心收集细胞沉淀，重悬细胞，将细胞悬液接种于胶原蛋白涂层的培养瓶中，将培养瓶置于氧气培养箱中，模拟肿瘤组织中的氧气环境，促进细胞生长和适应；S4、基因编辑和功能研究，使用CRISPR-Cas9系统进行特定基因的编辑，设计sgRNA并转染细胞，筛选编辑成功的细胞群体；S5、3D培养模型的建立，在低附着力培养皿中培养细胞形成3D球体，观察其在三维结构中的行为和药物反应；S6、单细胞分析和细胞异质性研究，使用流式细胞仪技术分离单个细胞，进行单细胞RNA测序，即scRNA-seq分析，研究细胞异质性及其在肿瘤中的功能表现；S7、培养和传代，每2～3天更换培养基，根据细胞生长情况进行传代，保持细胞的活力和稳定性。
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百度查询： 湖北省肿瘤医院(湖北省肿瘤研究所) 一种泌尿系肿瘤原代细胞的培养方法
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