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申请/专利权人：上海多宁生物科技股份有限公司

摘要：本申请公开了一种高表达的CHO细胞培养方法，涉及生物细胞培养技术领域，具体包括如下步骤：S1：将冻存的CHO细胞在培养基里复苏；其中，培养基中额外添加混合脂类，混合脂类为吐温80、生育酚、亚麻酸、胆固醇中二至四种物质组合而成；S2：每2‑3天进行一次传代操作S3：再次传代；S4：按照S2和S3方法传代2‑4次，细胞群体倍增时间稳定后开始接种，S5：培养后使用补料培养基进行批次补料；S6：培养14天‑16天收获，检测蛋白浓度；解决了细胞培养过程中细胞存在密度低、活率低、乳酸积累、蛋白产量低等问题，改善CHO细胞的生长和表达，降低了企业成本，也减少了实际工业生产过程由乳酸积累引发的技术问题。

主权项：1.一种高表达的CHO细胞培养方法，其特征在于，具体包括如下步骤：S1：将冻存的CHO细胞在培养基里复苏，将细胞置于37℃、8%二氧化碳、110-130rpm条件下的摇床中培养；其中，所述培养基中额外添加混合脂类，混合脂类为吐温80、生育酚、亚麻酸、胆固醇中二至四种物质组合而成；吐温80：0.025-0.75mgL，生育酚：0.1-3mgL，亚麻酸：0.225-6.75mgL，胆固醇：0.15-4.5mgL；所述CHO细胞为CHOK1细胞；S2：每2-3天进行一次传代操作，保持细胞处于早期对数生长期，细胞接种密度为0.3-1.0-1.0×106cellsmL；S3：当细胞密度达到4.5-6.0×106cellsmL，细胞活率≥95％，间隔2-3天时，再次传代；S4：按照S2和S3方法传代2-4次，细胞群体倍增时间稳定后开始接种，将细胞接种至所述培养基，125mL摇瓶或5L搅拌罐式生物反应器中进行培养；其中，摇床的温度为36.5-37℃，转速为130±20rpm，培养箱中CO2浓度设置为5%-10%；生物反应器的温度为36.5-37℃，初始转速为180±20rpm，pH设置为7.0±0.3，DO设置为40%；PDT稳定后偏差＜3h；接种密度在0.4-1.2×106cellsmL；S5：培养后使用补料培养基进行批次补料；其中，补料3-8%，至培养结束前1-2天停止补料；S6：培养14天-16天收获，检测蛋白浓度；其中，蛋白为抗体。

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