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用于分析靶相互作用的三元组合CRISPR筛选系统及其方法 

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申请/专利权人:香港大学

摘要:提供了用于多重基因组编辑或二元或三元组合CRISPR筛选的系统。还提供了对减轻疾病的基因组合的高通量筛选,以鉴定作为潜在治疗方案的二元和三元协同药物组合。还提供了慢病毒三元组合向导RNA表达盒和组合向导RNA文库。

主权项:1.用于基于CRISPR的多基因敲除筛选的系统,所述系统包含条码化gRNA表达盒,所述条码化gRNA表达盒包含:i与第一gRNA可操作地连接的第一启动子以及第一条码化测序区域;ii与第二gRNA可操作地连接的第二启动子以及第二条码化测序区域;iii与第三gRNA可操作地连接的第三启动子以及第三条码化测序区域;其中所述gRNA表达盒在单个载体中,所述第一启动子、第二启动子和第三启动子分别为人U6、小鼠U6和人H1启动子,并且所述人U6、小鼠U6和人H1启动子具有相同的修饰的3’末端序列,所述修饰的3’末端序列为5’-CACCG-3’;其中第一、第二和第三gRNA均包含修饰的gRNA支架;所述启动子包含与所述gRNA的gRNA靶序列的粘性末端互补的修饰的3’末端序列,所述3’末端序列与gRNA的gRNA靶序列的粘性末端退火;对退火的序列和所述gRNA支架进行合并消化和连接,以形成合并的条码化组合gRNA阵列的组装物。

全文数据:

权利要求:

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