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申请/专利权人：浙江工业大学
摘要：本发明公开了一种高效制备蝙蝠蛾拟青霉原生质体的方法，采用Yatalase和Driselase配置的混合酶液，能够获得较高得率的原生质体，可达31.83×106个mL；同时所得的原生质体能成功再生，再生率为2.54％，为利用原生质体技术改良蝙蝠蛾拟青霉的研究奠定了基础。
主权项：1.一种高效制备蝙蝠蛾拟青霉原生质体的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1菌丝的培养与预处理：蝙蝠蛾拟青霉菌丝块接种至液体PDA培养基中，19℃～25℃静置培养3天，离心收集菌丝，用氯化钾水溶液洗涤菌丝2～3次，离心去上清，得到预处理后的菌丝；2酶液的配置：取裂解酶，溶解于氯化钾水溶液中，经0.22μm微孔滤膜过滤除菌，收集滤液，即为酶液；所述裂解酶为Yatalase或Driselase中的一种或两种的混合；3原生质体的制备与纯化：向步骤2酶液中加入步骤1预处理后的菌丝，置于19～25℃摇床中，100-200rpm酶解1-5h；酶解结束后，用滤布过滤去除大部分菌丝，滤液离心后去除上清液，沉淀用氯化钾水溶液重悬，洗涤2～3次后，得到纯化后的原生质体；4原生质体的再生：将步骤3原生质体用氯化钾水溶液稀释后，涂布于再生培养基上，置20℃～25℃培养箱中培养，获得蝙蝠蛾拟青霉再生菌落；再生培养基组成：10gL麦芽糖、10gL葡萄糖、5gL酵母提取物、10gL蛋白胨、10gL蚕蛹粉、0.1gLMgSO4、0.2gLKH2PSO4，溶剂为水。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 浙江工业大学 一种高效制备蝙蝠蛾拟青霉原生质体的方法
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