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摘要：本发明属于生物技术领域，提供了一种利用Hunk蛋白通过TSC2‑mTOR途径调控自噬以改善糖尿病肾病肾小球系膜细胞纤维化的方法，包括、构建糖尿病肾病小鼠模型、DN小鼠指标检测与病理评估、细胞培养条件设定、Hunk蛋白过表达、验证Hunk蛋白表达、检测细胞自噬功能、评估细胞纤维化程度和细胞信号通路分析；本发明通过构建糖尿病肾病小鼠模型，并进行全面的代谢指标、肾功能检测以及病理学评估，能够准确模拟人类糖尿病肾病的发展过程，为后续研究提供可靠的实验基础，通过多方面的实验设计和检测手段，系统地研究了Hunk蛋白在糖尿病肾病中的作用机制，为糖尿病肾病的治疗提供了新的研究方向和潜在的治疗靶点。

主权项：1.一种利用Hunk蛋白通过TSC2-mTOR途径调控自噬以改善糖尿病肾病肾小球系膜细胞纤维化的方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、构建糖尿病肾病小鼠模型：选用BKS-dbdb小鼠，建立糖尿病肾病DN小鼠模型；S2、DN小鼠指标检测与病理评估；首先对DN小鼠进行代谢指标和肾功能的全面检测，接着采用HE、Masson、PAS染色技术对肾脏切片进行病理学评估，然后利用WesternBlot和免疫组化染色技术检测肾皮质中纤维化蛋白FN、ColIV、α-SMA、自噬标志蛋白LC3、Beclin-1、p62以及Hunk蛋白的分布和表达情况；S3、细胞培养条件设定：培养大鼠肾小球系膜细胞RMC，并分别设置低糖和高糖两种培养液环境；S4、Hunk蛋白过表达：通过pcDNA3.1-Hunk质粒瞬时转染RMC；S5、验证Hunk蛋白表达：利用WesternBlot技术检测RMC中Hunk蛋白的表达水平，确认转染效果；S6、检测细胞自噬功能：在高糖环境下培养RMC，并使用自噬激活剂雷帕霉素进行干预，然后通过WesternBlot技术检测自噬标志蛋白LC3、Beclin-1、p62的表达；S7、评估细胞纤维化程度：利用WesternBlot技术检测RMC中纤维化蛋白FN、ColIV、α-SMA的表达，评估Hunk过表达对高糖诱导的RMC纤维化的影响；S8、细胞信号通路分析：探讨增强Hunk表达对高糖诱导的RMC中TSC2-mTOR通路蛋白p-TSC2、TSC2、p-mTOR、mTOR表达的影响，以解析Hunk蛋白在糖尿病肾病中的分子机制。

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百度查询： 福建医科大学附属第一医院 一种利用Hunk蛋白通过TSC2-mTOR途径调控自噬以改善糖尿病肾病肾小球系膜细胞纤维化的方法