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摘要：本发明公开了一种从血浆中提取人抗凝血酶Ⅲ的方法，属于生物制药领域。本发明从去冷沉淀人血浆中提取人抗凝血酶Ⅲ的方法，包括新鲜冰冻人血浆去除冷沉淀；DEAESephadexA‑50凝胶吸附；聚乙二醇PEG‑4000提纯处理；亲和层析；巴氏病毒灭活；亲和层析；超滤浓缩；除菌过滤；纳米膜除病毒过滤；分装；冷冻干燥。本发明通过改善人抗凝血酶Ⅲ的提取工艺，制得的人抗凝血酶Ⅲ，稳定性好，产品纯度高，安全可靠，比活可达13IUmg蛋白质以上，满足市场的需求，也提高了珍贵血浆资源的利用价值。

主权项：1.一种从血浆中提取人抗凝血酶Ⅲ的方法，其特征在于包括如下步骤：1新鲜冰冻人血浆去除冷沉淀：将新鲜冰冻人血浆融化混合均匀后，经过流式离心机去除冷沉淀，取得离心后的血浆上清液；2DEAESephadexA-50凝胶吸附：在步骤1所得到的血浆上清液中加入DEAESephadexA-50凝胶，干凝胶的加入量为0.5-1.5gkg料液，干凝胶预先用70℃以上热注射用水进行溶胀，再用25℃以下冷注射用水进行冷却，最后用平衡缓冲液平衡，适当转速搅拌1.0-2.0小时，确保凝胶在溶液中混合均匀，转速不宜太快，过滤得滤液，凝胶经过再生后保存可以重复使用；平衡缓冲液配方为：0.01-0.02M枸橼酸钠，0.15-0.25M氯化钠，pH为7.0-8.0；3聚乙二醇PEG-4000提纯处理：将步骤2所得的滤液pH调整至6.0-7.0，加入10％-20％wv聚乙二醇PEG-4000，离心去除沉淀得上清液，再向所得上清液中加入20％-30％wv聚乙二醇PEG-4000，离心并回收沉淀；4亲和层析：肝素亲和柱先用平衡液充分平衡，将步骤3所得沉淀用平衡液溶解，然后用0.45μm滤芯过滤后上样，上样后先用平衡液冲40个柱体积，再用洗涤缓冲液冲15个柱体积，最后用洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱液；亲和层析中平衡液配方为：0.1-0.2MTris-HCl，0.01-0.02M柠檬酸三钠，0.2-0.3M氯化钠，pH7.0-8.0，洗涤缓冲液配方为：0.1-0.2MTris-HCl，0.01-0.02M柠檬酸三钠，0.3-0.4M氯化钠，pH7.0-8.0，洗脱缓冲液配方为：0.1-0.2MTris-HCl，0.01-0.02M柠檬酸三钠，1.5-2.5M氯化钠，pH7.0-8.0；5巴氏病毒灭活：向步骤4所得洗脱液中加入稳定剂，然后调整料液pH至7.0-8.0，将溶液置于60℃环境中处理10小时；稳定剂配方为：5％-10％柠檬酸钠，1.5-2.5M氯化钠，50-60％wv山梨醇，pH7.0-8.0；6亲和层析：肝素亲和柱先用平衡液充分平衡，将步骤5所得料液用0.45μm滤芯过滤后上样，上样后先用平衡液冲40个柱体积，再用洗涤缓冲液冲15个柱体积，最后用洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱液；7超滤浓缩：用10KD超滤膜浓缩步骤6所得洗脱液，然后用透析液等体积透析5-6倍，最后浓缩至人抗凝血酶Ⅲ效价50IUmL；透析液配方为：甘氨酸：1-4％ww，pH：7.0-8.0，液温：常温；8除菌过滤：用0.22μm滤芯对制品进行除菌过滤；9纳米膜除病毒过滤：先用0.1μm滤芯预过滤，再用15纳米滤芯进行除病毒过滤；10分装；11冷冻干燥：采取预冷，速冻、退火及一次干燥与二次干燥，最后得到人抗凝血酶Ⅲ冻干粉。

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