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一种基于dI修饰引物的单链DNA合成技术 

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摘要:本发明涉及一种基于dI修饰引物的单链DNA合成技术,包括:S1、利用一条带有一个dI碱基的PCR引物和一条普通引物,PCR扩增合成一条链带有dI碱基的双链DNA;S2、将步骤一的PCR产物进行纯化,去除PCR残留多余引物,为单链DNA合成提供高质量的双链DNA底物;S3、进行目标单链DNA的持续合成反应,在反应体系中加入步骤二制备的PCR产物、热稳定性内切核酸酶V、BstDNA聚合酶大片段、dNTP,合成目标单链DNA。本发明直接酶法合成单链DNA,单链合成产量为模板量的几百倍,模板链可以重复进行DNA单链的合成,合成的单链DNA的5’端为磷酸基团,可以直接作为DNA连接反应的底物。

主权项:1.一种基于dI修饰引物的单链DNA合成技术,其特征在于,包括以下能够持续合成单链DNA的工作步骤:S1、利用一条带有一个dI碱基的PCR引物和一条普通引物,进行PCR扩增,合成一条链带有dI碱基的双链DNA,完成PCR扩增反应体系的建立。S2、将步骤一的PCR产物进行纯化,去除PCR反应中的残留多余引物,为后续的单链DNA合成提供高质量的双链DNA底物。S3、进行目标单链DNA的持续合成反应,在反应体系中加入步骤二制备的PCR产物、热稳定性内切核酸酶V、BstDNA聚合酶大片段,来合成目标单链DNA。

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