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利用重组巴斯德毕赤酵母生产金环蛇抗菌肽的方法 

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摘要:一种利用重组巴斯德毕赤酵母生产金环蛇抗菌肽的方法,属于生物发酵技术领域。本发明的目的是加快酵母生长速度,提高抗菌肽表达产量,缩短发酵周期,降低生产成本,适合金环蛇抗菌肽cathelicin‑BF的大规模发酵生产的利用重组巴斯德毕赤酵母生产金环蛇抗菌肽的方法。本发明在甲醇诱导表达阶段向发酵培养基中加入谷氨酰胺和胆固醇两种生长调节剂,能够有效减轻酵母生长过程中的代谢负担,加快酵母生长速度,促进蛋白质合成,提高抗菌肽的产量。使用本发明的培养基表达金环蛇抗菌肽cathelicin‑BF,可以使蛋白产量提高17%以上,节约了生产成本,特别适用于金环蛇抗菌肽cathelicin‑BF的工业化大规模生产,其发酵产物具有抗衰、抗皱、抗氧化等功能,在医疗、化妆品等领域有着广阔的应用价值和市场前景。

主权项:1.一种利用重组巴斯德毕赤酵母生产金环蛇抗菌肽的方法,其特征在于:其步骤是:a、在超净工作台中将金环蛇抗菌肽cathelicin-BF菌种接种至YPD培养基中,30℃摇床培养24h,转速250rpm,菌体浓度OD600=6-8,得一级种子液;b、随后将10×YNB、生物素和一级种子液接种于BMGY培养基中,30℃,转速250rpm,培养24h后得二级种子液;c、配制2.5LBMMY培养基于5L发酵罐中,121℃灭菌30min后,用50%氨水调节pH为6.0,将10×YNB、生物素、谷氨酰胺、胆固醇和二级种子液接种至发酵罐中,当溶氧剧烈变化,菌体湿重大于300gL时,饥饿0.5-1h后,用甲醇诱导金环蛇抗菌肽cathelicin-BF表达,诱导96h结束。

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