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摘要：本发明公开了一种基于UPLC‑MS的抑制晚期糖基化终产物活性的药物的筛选方法。所述方法使用牛血清蛋白与核糖在体外合成AGEs来确定所选药物是否具有抑制AGEs的能力，选择具有抑制能力的药物；然后使用高糖细胞模型模拟体内糖尿病，细胞实验鉴定出具有最高抑制能力的药物；最后建立糖尿病动物模型，以检测细胞实验中筛选的本发明方法简单高效，可以快速筛选治疗AGEs相关疾病的所需药物。

主权项：1.基于UPLC-MS的抑制晚期糖基化终产物活性的药物的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：1药物的提取：将筛选中药破碎成粉末，然后在95％乙醇溶液中蒸煮2h以提取中药成分，最后在60℃下蒸发浓缩，直至呈膏状，得到中药提取物；2体外AGEs的合成：设置模型组、空白组和给药组，各组的处理方式如下：模型组：将浓度为5mgmL的牛血清白蛋白与0.5molL的D-核糖在pH7.4的PBS中混合，室温下放置一天进行充分溶解，用0.22μm无菌滤头过滤除菌，将混合物在5％CO2-95％O2中于37℃温育14天；空白组：使用浓度为5mgmL的牛血清白蛋白，用0.22μm无菌滤头过滤除菌，在5％CO2-95％O2中于37℃温育14天；给药组：将浓度为5mgmL的牛血清白蛋白与0.5molL的D-核糖在pH7.4的PBS中混合，室温下放置一天进行充分溶解，用0.22μm无菌滤头过滤除菌，将中药提取物用10％二甲基亚砜溶解，过滤除菌之后，按2mgml的添加量加入到BSA和D-核糖的混合反应体系中，将混合物在5％CO2-95％O2中于37℃温育14天；3液质检测AGEs：孵育后，对各组样品用PBS透析以除去未反应的糖，然后将样品冻干后溶于水中，并加入硼氢化钠的硼酸钠缓冲液，室温温育2小时，然后添加三氟乙酸溶液，12000g离心10分钟沉淀蛋白质，再次加入等量的三氟乙酸溶液并离心，除去上清液，除去所有TFA后，添加HCl，然后在氮吹作用下将混合物加热至110℃，加热20小时，在氮吹作用下将液体吹干，并将固体物质溶解在LC-MSMS起始洗脱液中，进行液质测试，流动相中，溶剂A：0.1％甲酸，溶剂B：乙腈，流速0.3mLmin，柱温40℃，梯度洗脱程序如下； ，质谱条件：离子源ESI源，检测方式为正离子检测，参数如下： ，分析各组中合成的AGEs的含量；4细胞高糖模型的建立：将HBZY-1细胞在不含胎牛血清的培养基中饥饿处理12h，设置模型组、空白组和给药组，各组的处理方式如下：空白组：饥饿处理后的HBZY-1细胞用DMEM低糖培养基培养48h；模型组：饥饿处理后的HBZY-1细胞用DMEM高糖培养基培养48h；给药组：中药提取物用DMSO溶解，用无菌滤头过滤除菌，加入到DMEM高糖培养基中，使药物浓度为100gml，然后接种饥饿处理后的HBZY-1细胞，细胞培养48h；5液质检测细胞中的AGEs在各组中加入甲醇，然后用刮刀将细胞从板上机械分离并转移到玻璃小瓶中，完全干燥，向每个样品中加入HCl，再将样品在110℃的氮吹加热块中孵育20小时，然后在氮吹作用下干燥，将底部固体溶解在含0.1％甲酸的乙腈和水的混合溶液中，水:乙腈的体积比为1:1，进行液质测试，液质条件同步骤3，分析各组中合成的AGEs的含量；6根据步骤3和5中合成的AGEs的含量，综合分析，筛选出合成的AGEs的含量相对最低的药物。

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百度查询： 南京理工大学 基于UPLC-MS的抑制晚期糖基化终产物活性的药物的筛选方法