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摘要：本发明提供了固相萃取‑超高效液相色谱‑串联质谱法检测蜂蜜中植物源性毒素的方法，属于检测技术领域。本发明提供的固相萃取‑超高效液相色谱‑串联质谱法检测蜂蜜中植物源性毒素的方法，包括如下步骤：a、标准物质的配制；b、样品前处理；c、UPLC‑MSMS测定。本发明提供了固相萃取‑超高效液相色谱‑串联质谱法检测蜂蜜中植物源性毒素的方法，立足于蜂蜜中同时监测多种植物毒素的应用需求，通过优化提取净化方法和仪器方法，建立同时测定27种PAs、3种木藜芦烷类毒素、3种托品烷类毒素和6种雷公藤类毒素的检测方案。为监测蜂蜜中多种植物毒素残留、提升蜂蜜品质提供技术性支撑。

主权项：1.固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法检测蜂蜜中植物源性毒素的方法，其特征在于：包括如下步骤：a、标准物质的配制：分别准确吸取不同体积的27种PAs混标溶液、闹羊花毒素II、闹羊花毒素III、木藜芦毒素I、阿托品、东茛菪碱、山茛菪碱、雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷公藤吉碱、雷公藤定碱、雷公藤次碱、雷酚内酯的标准溶液至10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀得混合标准中间溶液，其中，除闹羊花毒素Ⅲ、雷公藤甲素和雷公藤内酯酮为10μgmL外，其余组分浓度均为1μgmL；所述的27种PAs混标溶液是指含石松胺、石松胺氮氧化物、倒千里光碱氮氧化物、蓝蓟定氮氧化物、欧天芥菜碱、欧天芥菜碱氮氧化物、春千里光碱氮氧化物、克氏千里光碱、促黑激素、芝麻菜叶千里光碱氮氧化物、野百合碱、野百合碱氮氧化物、促黑激素氮氧化物、倒千里光碱、毛束草碱、千里光菲林碱、千里光菲林碱氮氧化物、天芥菜碱、天芥菜碱氮氧化物、千里光宁碱、千里光宁碱氮氧化物、蓝蓟定、毛果天芥菜碱、毛果天芥菜碱氮氧化物、夹可灵、夹可灵氮氧化物、春千里光碱的甲醇溶液；b、样品前处理：准确称取混匀样品2g，置于离心管中，加入10mL0.1%-2%的甲酸水溶液，涡旋混匀，超声提取，于15℃下9500rmin离心5min，取上清液，得到待净化液；取待净化液过亲水亲脂平衡型固相萃取柱，加入5mL水进行淋洗，抽干5min；加入10mL甲醇洗脱，收集洗脱液于氮吹管中，45℃氮吹至近干，加入1.0mL甲酸-5mmolL含0.1%甲酸的乙酸铵水溶液，体积比为1：1，溶解残渣，涡旋混合1min，超声2min，过0.22μm滤膜，滤液供UPLC-MSMS测定；所述的亲水亲脂平衡型固相萃取柱为官能化聚苯乙烯二乙烯苯萃取柱，萃取柱的装量为200mg，柱体积为6mL；c、UPLC-MSMS测定的条件为：液相色谱条件为：色谱柱:ACQUITYUPLCHSSC183.0×150mm，1.7μm；流动相：A为5mmolL含0.1%甲酸乙酸铵溶液，B为甲醇溶液；流速：0.3mLmin；柱温：40℃；进样量：1μL；梯度洗脱程序为：0-2.0min，95%-85%流动相A；2.0-13.0min，85%-60%流动相A；13.0-15.0min，60%-5%流动相A；15.0-20.0min，5%-5%流动相A；20.0-21.0min，5%-95%流动相A；21.0-25.0min，95%-95%流动相A；质谱条件为：离子源类型：ESI源，气帘气流速：35psi；喷雾气流速：55psi；辅助加热气流速：55psi；离子源温度：500℃；离子化电压：5000V；扫描模式：多反应监测模式，39种植物源性毒素的质谱参数分别为：石松胺：保留时间为8.01min，母离子为300.3mz，定量离子为138.3mz，碰撞电压为26eV，定性离子为156.3mz，碰撞电压为39eV；石松胺氮氧化物：保留时间为9.25min，母离子为316.1mz，定量离子为172.1mz，碰撞电压为38eV，定性离子为138.1mz，碰撞电压为36eV；倒千里光碱氮氧化物：保留时间为10.19min，母离子为368.2mz，定量离子为136.2mz，碰撞电压为38eV，定性离子为118.2mz，碰撞电压为40eV；蓝蓟定氮氧化物：保留时间为14.83min，母离子为414.2mz，定量离子为254.1mz，碰撞电压为41eV，定性离子为352.1mz，碰撞电压为33eV；欧天芥菜碱：保留时间为7.44min，母离子为330.1mz，定量离子为138.1mz，碰撞电压为31eV，定性离子为156.3mz，碰撞电压为39eV；欧天芥菜碱氮氧化物：保留时间为8.20min，母离子为346.1mz，定量离子为172.1mz，碰撞电压为40eV，定性离子为328.0mz，碰撞电压为30eV；春千里光碱氮氧化物：保留时间为13.03min，母离子为352.2mz，定量离子为118.1mz，碰撞电压为39eV，定性离子为120.1mz，碰撞电压为38eV；克氏千里光碱：保留时间为15.38min，母离子为366.2mz，定量离子为168.2mz，碰撞电压为38eV，定性离子为150.3mz，碰撞电压为34eV；促黑激素：保留时间为7.72min，母离子为300.1mz，定量离子为138.2mz，碰撞电压为26eV，定性离子为156.2mz，碰撞电压为39eV；芝麻菜叶千里光碱氮氧化物：保留时间为6.85min，母离子为366.1mz，定量离子为136.1mz，碰撞电压为42eV，定性离子为120.1mz，碰撞电压为40eV；野百合碱：保留时间为5.35min，母离子为326.2mz，定量离子为120.3mz，碰撞电压为44eV，定性离子为237.3mz，碰撞电压为32eV；野百合碱氮氧化物：保留时间为6.75min，母离子为342.1mz，定量离子为137.4mz，碰撞电压为37eV，定性离子为236.0mz，碰撞电压为37eV；促黑激素氮氧化物：保留时间为8.92min，母离子为316.1mz，定量离子为111.2mz，碰撞电压为52eV，定性离子为138.1mz，碰撞电压为36eV；倒千里光碱：保留时间为9.80min，母离子为352.2mz，定量离子为120.3mz，碰撞电压为38eV，定性离子为138.3mz，碰撞电压为37eV；毛束草碱：保留时间为10.19min，母离子为354.2mz，定量离子为222.2mz，碰撞电压为38eV，定性离子为120.2mz，碰撞电压为44eV；千里光菲林碱：保留时间为10.60min，母离子为334.2mz，定量离子为120.2mz，碰撞电压为36eV，定性离子为138.2mz，碰撞电压为35eV；千里光菲林碱氮氧化物：保留时间为11.25min，母离子为350.2mz，定量离子为120.1mz，碰撞电压为39eV，定性离子为118.2mz，碰撞电压为40eV；天芥菜碱：保留时间为11.03min，母离子为314.2mz，定量离子为138.2mz，碰撞电压为26eV，定性离子为156.2mz，碰撞电压为37eV；天芥菜碱氮氧化物：保留时间为11.99min，母离子为330.2mz，定量离子为172.1mz，碰撞电压为38eV，定性离子为138.2mz，碰撞电压为36eV；千里光宁碱：保留时间为12.77min，母离子为336.2mz，定量离子为120.2mz，碰撞电压为36eV，定性离子为138.2mz，碰撞电压为38eV；千里光宁碱氮氧化物：保留时间为13.36min，母离子为352.2mz，定量离子为118.1mz，碰撞电压为39eV，定性离子为136.3mz，碰撞电压为37eV；蓝蓟定：保留时间为14.79min，母离子为398.2mz，定量离子为120.2mz，碰撞电压为32eV，定性离子为220.2mz，碰撞电压为23eV；毛果天芥菜碱：保留时间为16.02min，母离子为412.2mz，定量离子为120.2mz，碰撞电压为38eV，定性离子为336.3mz，碰撞电压为24eV；毛果天芥菜碱氮氧化物：保留时间为16.26min，母离子为428.2mz，定量离子为254.1mz，碰撞电压为40eV，定性离子为410.0mz，碰撞电压为31eV；夹可灵：保留时间为7.28min，母离子为352.1mz，定量离子为120.1mz，碰撞电压为38eV，定性离子为155.2mz，碰撞电压为38eV；夹可灵氮氧化物：保留时间为7.87min，母离子为368.1mz，定量离子为296.1mz，碰撞电压为32eV，定性离子为120.1mz，碰撞电压为45eV；春千里光碱：保留时间为12.54min，母离子为336.2mz，定量离子为120.1mz，碰撞电压为36eV，定性离子为138.1mz，碰撞电压为38eV；闹羊花毒素Ⅱ：保留时间为16.52min，母离子为433.2mz，定量离子为415.2mz，碰撞电压为37eV，定性离子为373.2mz，碰撞电压为37eV；闹羊花毒素Ⅲ：保留时间为15.21min，母离子为386.2mz，定量离子为315.0mz，碰撞电压为17eV，定性离子为297.0mz，碰撞电压为20eV；木藜芦毒素Ⅰ：保留时间为14.40min，母离子为435.3mz，定量离子为375.2mz，碰撞电压为30eV，定性离子为357.2mz，碰撞电压为33eV；阿托品：保留时间为11.55min，母离子为290.2mz，定量离子为124.0mz，碰撞电压为32eV，定性离子为93.0mz，碰撞电压为40eV；东茛菪碱：保留时间为8.81min，母离子为304.1mz，定量离子为138.0mz，碰撞电压为30eV，定性离子为156.0mz，碰撞电压为23eV；山茛菪碱：保留时间为9.77min，母离子为306.2mz，定量离子为140.2mz，碰撞电压为33eV，定性离子为122.1mz，碰撞电压为37eV；雷公藤甲素：保留时间为16.79min，母离子为361.2mz，定量离子为145.0mz，碰撞电压为38eV，定性离子为128.0mz，碰撞电压为80eV；雷公藤内酯酮：保留时间为16.73min，母离子为359.3mz，定量离子为91.0mz，碰撞电压为68eV，定性离子为128.0mz，碰撞电压为80eV；雷公藤吉碱：保留时间为17.02min，母离子为858.4mz，定量离子为206.1mz，碰撞电压为50eV，定性离子为686.1mz，碰撞电压为47eV；雷公藤定碱：保留时间为17.09min，母离子为884.5mz，定量离子为176.0mz，碰撞电压为56eV，定性离子为194.0mz，碰撞电压为55eV；雷公藤次碱：保留时间为17.19min，母离子为868.1mz，定量离子为206.0mz，碰撞电压为50eV，定性离子为178.0mz，碰撞电压为65eV；雷酚内酯：保留时间为17.40min，母离子为313.2mz，定量离子为253.1mz，碰撞电压为28eV，定性离子为271.0mz，碰撞电压为28eV。

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