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摘要：本发明公开了一种过表达细胞色素c的重组大肠杆菌电催化剂的制备方法及其应用，利用双基因协同工程技术将促进细胞色素c蛋白生物合成的torY和fech目的基因与载体质粒整合构建重组表达质粒，并将重组质粒转入野生大肠杆菌中进行诱导表达培养，最终得到过表达细胞色素c蛋白的重组大肠杆菌全细胞生物电催化剂。本发明制备的电催化剂用作微生物燃料电池的阴极氧还原催化时展现出优秀的电催化和降解生活废水中有机污染物性能，全电池产电性能和葡萄糖模型污染物降解能力分别实现最大功率密度为334µWcm−2和140h内葡萄糖的降解量为22.9mM。

主权项：1.一种过表达细胞色素c的重组大肠杆菌电催化剂的制备方法，其特征在于具体步骤为：步骤S1：从NCBI数据库中检索大肠杆菌中细胞色素c蛋白生物合成所需的torY和fech目的基因信息和编码序列，T7启动子作为启动基因促进转录开始，将torY和fech目的基因整合到载体质粒pCOLADuet-1中构建重组表达质粒Cytc-pCOLADuet-1，其中torY目的基因上游的NcoⅠ酶切位点引物序列为：5'AACTTTAATAAGGAGATATAATGCGAGGGAAAAAACGCAT3'；torY目的基因下游的NotⅠ酶切位点引物序列为：5'CTGTTCGACTTAAGCATTATTCACTGTTTCTCGGTAATAT3'；fech目的基因上游的NdeⅠ酶切位点引物序列为：5'TAAGAAGGAGATATACATATGCGTCAGACTAAAACCGG3'；fech目的基因下游的XhoⅠ酶切位点引物序列为：5'GGTTTCTTTACCAGACTCGAGTTAGCGATACGCGGCAACAAG3'；步骤S2：将步骤S1构建的重组表达质粒转化到大肠杆菌感受态细胞中，在LB液体培养基中培养40~80min，再将转化后的大肠杆菌悬液铺展到含有90~120μgmL−1卡那霉素的LB琼脂平板上，于35~40℃生长12~16h用于质粒维持，并挑选单个菌落在LB液体培养基中于35~40℃过夜纯化培养，最后按体积比1:100的比例转接入新的含有90~120μgmL−1卡那霉素的LB液体培养基中，培养3~5h后加入IPTG诱导剂至其浓度为0.05~0.6mM，再于10~37℃诱导表达培养4~20h，最终得到过表达细胞色素c的重组大肠杆菌电催化剂。

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百度查询： 河南师范大学 一种过表达细胞色素c的重组大肠杆菌电催化剂的制备方法及其应用