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摘要：本发明公开了一种金银纳米团簇偶联DNA荧光纳米探针的制备方法及其应用。首先以牛血清白蛋白BSA为模板还原Au3+、Ag+构成纳米团簇的金属核心NC，依次添加组氨酸His和精氨酸Arg物理吸附至NC表面得到粒径为10nm左右的纳米团簇NCHR。His分子可以通过与BSA之间形成氢键、静电相互作用等来稳定NC结构并有效增强其荧光强度。Arg分子中胍基具有穿透细胞膜的功能，能够促进细胞对NCHR的快速摄取。选择最佳荧光强度及细胞摄取效果的NCHR偶联DNA发夹h，NCHR‑h与细胞共孵育1h就能够检测病毒基因的荧光信号，缩短了检测时间，实现灵敏快速的病毒检测。细胞外检测范围为10‑400nM，最低检测限为5.3nM。

主权项：1.一种金银纳米团簇偶联DNA荧光纳米探针的制备方法，其特征在于，以牛血清白蛋白BSA为模板合成金银纳米团簇NC，在其表面通过静电相互作用修饰组氨酸His与精氨酸Arg分子，制备得到NCHR；NCHR以共价键偶联靶向新冠病毒基因组的DNA发夹h，离心除去未偶联的DNA，得到纳米荧光探针NCHR-h；荧光纳米材料NCHR的制备方法包括如下步骤：1将BSA溶解在超纯水中；2在37℃条件下，向上述溶液中依次加入四水合氯金酸HAuCl4·4H2O溶液和硝酸银溶液，分别反应5min；3向上述溶液中加入氢氧化钠NaOH溶液，反应24h，合成金银纳米团簇NC；4向上述反应结束的溶液中分别加入15、22.5、30mMHis溶液，反应3h，分别合成NCH1、NCH2和NCH3；4选择荧光强度最佳的NCH2用于下一步的优化，后续简称为NCH；向反应结束的NCH溶液中分别加入22.5、34、45mMArg溶液，反应3h，采用10kda超滤管超滤纯化，重新分散于PBS溶液中，分别合成NCHR1、NCHR2和NCHR3，保存于4℃；NaOH溶液的浓度为1M，所述三组NCH的摩尔比分别为NCH1＝BSA:HAuCl4·4H2O:AgNO3:His＝1:10:1.7:4；NCH2＝BSA:HAuCl4·4H2O:AgNO3:His＝1:10:1.7:6；NCH3＝BSA:HAuCl4·4H2O:AgNO3:His＝1:10:1.7:8；三组NCHR的述摩尔比分别为NCHR1＝BSA:HAuCl4·4H2O:AgNO3:His:Arg＝1:10:1.7:6:6；NCHR2＝BSA:HAuCl4·4H2O:AgNO3:His:Arg＝1:10:1.7:6:9；NCHR3＝BSA:HAuCl4·4H2O:AgNO3:His:Arg＝1:10:1.7:6:12；荧光纳米探针NCHR-h的制备方法包括如下步骤：1将NCHR用PBS溶液稀释配置为1mgmL-1的溶液；2在上述溶液中加入1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺使其在整个体系中终浓度为1mgmL-1，活化1h；3将DNA以95℃变性5min，之后阶梯式降温至室温，退火形成发夹结构，所述DNA浓度为10×10-6M；4将上述DNA发夹溶液加入活化结束的NCHR溶液中，37℃避光反应12h，采用30kda超滤管超滤纯化去除未偶联的DNA，重新分散于PBS溶液中，合成NCHR-h，保存于4℃。

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百度查询： 北京化工大学 一种金银纳米团簇偶联DNA荧光纳米探针的制备方法及其应用