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摘要：本申请属于生物领域，公开了一种敲除TLR15基因的单克隆LMH细胞系的制备方法，包括如下步骤：步骤1：制备连接有TLR15guideRNA的慢病毒；步骤2：采用慢病毒感染LMH细胞，筛选成功感染慢病毒的LMH细胞；步骤3：将步骤2得到的LMH细胞分离成为单细胞并加入到单细胞培养基中进行培养，将培养后得到的细胞进行鉴定，得到敲除TLR15基因的单克隆LMH细胞系。本发明通过慢病毒转染法转染LMH细胞，将转染后的LMH细胞分离成为单个细胞后采用特制的单细胞培养基进行培养，可以得到敲除TLR15基因的单克隆LMH细胞系，有效的克服了传统方法无法成功制备敲除TLR15基因的单克隆LMH细胞系的难题。同时，本发明还提供了一种敲除TLR15基因的单克隆LMH细胞系。
主权项：1.一种敲除TLR15基因的单克隆LMH细胞系的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：制备连接有TLR15guideRNA的慢病毒；步骤2：采用慢病毒感染LMH细胞，筛选成功感染慢病毒的LMH细胞；步骤3：将步骤2得到的LMH细胞分离成为单细胞并加入到单细胞培养基中进行培养，将培养后得到的细胞进行鉴定，得到敲除TLR15基因的单克隆LMH细胞系；所述单细胞培养基包括含有18～22wt％FBS的DMEMF12培养基和细胞上清液；所述单细胞培养基中还含有终浓度为8～12μgmL的转铁蛋白、终浓度为20～30ngmL的生长因子以及双抗；所述细胞上清液的制备方法为：采用含8～12wt％FBS的DMEMF12培养基培养鸡肝癌细胞，培养一段时间后收集上清液即可得到所述细胞上清液；所述TLR15guideRNA的序列如SEQIDNO.1所示。
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百度查询： 汕尾市农业科学院 汕尾市动物疫病预防控制中心 敲除TLR15基因的单克隆LMH细胞系及其制备方法
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