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摘要:本公开涉及,根据一些实施方式,用于从源材料例如,包含或构成生物流体、组织和或样本的样品制备关于目标序列富集的多核苷酸文库的方法和组合物。方法和组合物可以提供对靶向的多核苷酸的有效富集。富集可以包括增加来自源材料的目标其可以以低丰度存在与产生的文库其可以以更高丰度存在的相对丰度。在一些实施方式中,方法包括将衔接子附接例如,连接、联结或以其它方式融合到感兴趣的片段、切口平移、扩增例如,线性扩增以及使用例如亲和标记进行目标序列选择。
主权项:1.方法,其包括:a将DNA衔接子融合到片段群体的双链多核苷酸片段的5’端,其中所述DNA衔接子包含下链和上链,其中:i所述衔接子上链包含,从5’到3’:与线性扩增退火位点互补的至少8个核苷酸的序列,任选地,样品标签,任选地,独特分子标识符UMI;和与所述衔接子下链互补的序列;和ii所述衔接子下链包含不可延伸的3’端,其中所述多核苷酸片段中的一个或多个包含目标序列并且其中形成融合产物,所述融合产物包含融合到所述多核苷酸片段的5’端的所述衔接子上链的3’端和包含所述衔接子下链的未融合5’端与所述多核苷酸片段的3’端的切口;b使所述融合产物与切口平移聚合酶接触,用于将核苷酸模板化添加到所述多核苷酸片段的所述3’端以形成包含所述多核苷酸片段的3’延伸部的切口平移产物,所述延伸部与所述衔接子上链互补;和c使所述切口平移产物与具有与所述线性扩增退火位点互补的序列的引物和聚合酶接触以产生线性扩增的切口平移产物,所述线性扩增的切口平移产物包含,5’到3’方向上:与所述线性扩增退火位点互补的序列,任选地,所述样品标签的序列,任选地,所述UMI的序列,所述衔接子上链的部分的序列,所述多核苷酸片段中的一个的序列,和任选地,与所述衔接子下链的部分互补的序列。
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