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摘要：本发明涉及一种酶活性提高的麦芽糖淀粉酶突变体及其筛选方法，属于生物工程技术领域。本发明首先构建麦芽糖淀粉酶突变体文库，之后在重组枯草芽孢杆菌中使用Pglvc和PamyE启动子分别表达荧光蛋白和麦芽糖淀粉酶突变体，其中Pglvc经过突变，对麦芽糖的响应范围和诱导强度进一步提升。由于麦芽糖淀粉酶突变体与可溶性淀粉反应生成麦芽糖，在麦芽糖诱导下Pglvc启动子表达荧光蛋白，因此通过重组菌株的荧光强度差异，从中筛选高活性麦芽糖淀粉酶突变体AmyMQ440N和AmyMS442NQ661L，突变体较野生型在酶活性、催化效率和热稳定性等方面均得到了明显提升，能够更广泛地应用于水解淀粉制备麦芽糖。
主权项：1.一种麦芽糖淀粉酶的高通量筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1、以麦芽糖淀粉酶基因为模板，进行易错PCR反应，获得麦芽糖淀粉酶突变体文库，所述麦芽糖淀粉酶基因序列如SEQIDNO.1所示；步骤S2、构建第一表达载体和第二表达载体，所述第一表达载体使用Pglvc启动子表达荧光蛋白，所述第二表达载体使用PamyE启动子表达麦芽糖淀粉酶突变体，所述Pglvc启动子核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；步骤S3、将所述第一表达载体和第二表达载体转入宿主枯草芽孢杆菌中，得到重组枯草芽孢杆菌；步骤S4、在反应体系中添加所述重组枯草芽孢杆菌，以可溶性淀粉为底物，得到发酵上清液，麦芽糖淀粉酶突变体与可溶性淀粉反应生成麦芽糖，在麦芽糖诱导下Pglvc启动子表达荧光蛋白；步骤S5、检测发酵上清液中荧光强度，麦芽糖淀粉酶突变体酶活与荧光强度呈正相关，从中筛选高活性麦芽糖淀粉酶突变体。
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百度查询： 江南大学 一种酶活性提高的麦芽糖淀粉酶突变体及其筛选方法
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