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摘要：本发明公开了一种高效的农杆菌介导的飞扬草遗传转化方法，属于植物基因工程技术领域。该方法主要包括：1）农杆菌的活化培养；2）种子消毒及材料的选取；3）诱导愈伤组织；4）侵染液的制备：将农杆菌在YEB液体培养基中培养，加入MS液体培养基中，调节菌液至OD600=0.3‑0.9之间，然后加入100μmolL乙酰丁香酮及100μmolLMgCl2，摇匀；5）侵染；6）共培养；7）清洗恢复培养；8）筛选分化与诱导生根；9）植株再生及鉴定。通过上述步骤可以成功构建飞扬草遗传转化体系，转化得到的阳性植株转化率高达76.19%。本发明对于快速创制转基因飞扬草种质具有重要的意义和价值。
主权项：1.一种高效的农杆菌介导的飞扬草遗传转化方法，其特征在于，包括以下步骤：以无菌飞扬草幼苗的叶片为外植体，接种到愈伤诱导培养基进行愈伤组织诱导；所述愈伤诱导培养基包括以下组分：MS液体培养基+萘乙酸+6-苄氨基嘌呤+蔗糖+琼脂；将诱导形成的愈伤组织用农杆菌浸染液浸染，浸染完成后，弃去浸染液，转移到共培养基上培养；所述共培养基包括以下组分：MS液体培养基+蔗糖+琼脂+萘乙酸+6-苄氨基嘌呤+乙酰丁香酮+特美汀；共培养后将愈伤组织转移到恢复培养基上进行恢复培养，之后再经分化培养基进行筛选分化，以及生根培养基进行诱导生根，生根后进行移栽，得到飞扬草成苗；所述恢复培养基包括以下组分：MS液体培养基+蔗糖+琼脂+萘乙酸+6-苄氨基嘌呤+特美汀；所述分化培养基包括以下组分：MS液体培养基+蔗糖+琼脂粉+萘乙酸+6-苄氨基嘌呤+乙酰丁香酮+特美汀+卡那霉素；所述生根培养基包括以下组分：MS液体培养基+吲哚丁酸+蔗糖+琼脂+马铃薯；所述农杆菌浸染液是通过将农杆菌重组菌发酵液离心获取菌体，再用MS液体培养基重悬至OD600为0.3-0.9，加入100μmolL乙酰丁香酮和100μmolL氯化镁得到。
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百度查询： 中国热带农业科学院三亚研究院 中国热带农业科学院橡胶研究所 一种高效的农杆菌介导的飞扬草遗传转化方法
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