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摘要：本发明公开基于XRCC3与XPC基因分析卵巢癌早期筛查方法，在通过识别基因多态性为卵巢癌的早期诊断提供新的生物标志物，该方法包括从临床卵巢癌患者和对照组收集外周血样本，提取全基因组DNA并进行纯化，随后，利用22KHumanGenomeArray芯片进行基因杂交，分析XRCC3和XPC基因的特定多态性位点，经过扩增、片段化和杂交后，使用激光扫描仪获取高分辨率的荧光图像，并通过图像分析软件评估基因表达差异，最终，通过RT‑PCR技术验证显著差异基因，通过XRCC3和XPC基因的特定多态性位点，有助于早期诊断卵巢癌。

主权项：1.基于XRCC3与XPC基因分析卵巢癌早期筛查方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、从实验组-临床卵巢癌患者和对照组-其他良性疾病就诊患者中各收集外周血液样本40例，为XRCC3和XPC基因检测提供基础样本；步骤二、使用DNA提取试剂盒从收集到的血液样本中提取全基因组DNA，使用DNACleanConcentratorTM-5试剂盒纯化，将抑制因子和污染物去除，再通过NanoDrop紫外分光光度计测定DNA浓度，同时使用0.7％的琼脂糖凝胶进行电泳检测，筛选合格DNA样本；步骤三、准备22KHumanGenomeArray芯片，所述芯片包含21522条OligoDNA探针，其中特异性探针用于识别XRCC3基因的A4541G、A17893G、T241M位点以及XPC基因的Ala499Val、Lys939Gln位点，每条探针特异性识别一个人类基因转录本，将实验组-临床卵巢癌患者的mRNA和正常对照组-其他良性疾病的mRNA逆转录为cDNA，将cDNA作为探针与芯片上的XRCC3和XPC特异性探针进行杂交；步骤四、对提取的DNA样本定量分析，标准化至50ngμL，所需芯片分析的DNA样本量为200ng，在样本中加入0.1NNaOH使DNA变性为单链，便与芯片上的XRCC3和XPC基因特异性探针结合，随后，将中和后的样本加入全基因组扩增试剂，在37℃恒温条件下孵育过夜，使扩增后的DNA总量达到初始上样量的2000-3000倍；步骤五、扩增后的DNA样本进行可控的酶解处理，使片段化过程不损害XRCC3和XPC基因的完整性，片段化后，通过加入异丙醇沉淀，4℃离心以富集片段化的DNA，随后，在空气中干燥并重悬于杂交缓冲液中；步骤六、将重悬于杂交缓冲液中的DNA样本与已准备好的芯片杂交，置于杂交炉内反应过夜，此时，片段化的DNA与芯片上XRCC3和XPC基因位点特异性探针的有效结合，芯片总共包含610000种微珠类型，其中每种微珠对应检测一个SNP位点；步骤七、清洗去除未杂交及非特异性杂交的DNA，仅保留与XRCC3和XPC基因位点结合的DNA，利用捕获到的DNA在芯片上进行单碱基延伸反应，并在芯片上添加可检测的标签基团，以区分XRCC3和XPC基因中的不同样本的SNP类型，将反应完成的芯片置于XC4试剂中包被，形成保护层以稳定XRCC3和XPC基因的检测信号；步骤八、使用LuxScan10KA双通道激光扫描仪对芯片进行扫描，激光激发芯片上单碱基延伸产物的荧光基团，生成高分辨率的图像，所得数据导入LuxScan3.0图像分析软件，分析OC组织与正常组织之间的荧光信号强度和比值，使用12个管家基因进行均衡；在数据分析中，所设定判定XRCC3和XPC基因差异表达的标准如下：标准一：OC组织和正常组织的比值ratio需大于2.0或小于0.5，其基因表达变化在2倍以上，反映出显著的差异；标准二：OC组织和正常组织信号其中之一强度需大于800，或二者均需大于200，且显性表达数据在所有样本中能够重复；步骤九、在基因表达谱中选择XRCC3和XPC基因中ratio值差异显著的上调和下调基因各一条，利用RT-PCR技术验证，确认XRCC3和XPC基因在卵巢癌患者中的表达差异。

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