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摘要：本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及一种Ⅺ型新城疫病毒F48E9的重组拯救病毒制备方法、重组病毒及应用。通过建立Ⅺ型新城疫病毒F48E9株的反向遗传操作系统，将反向遗传系统中全长基因组P基因进行定点氨基酸突变，并对其全长NDV基因组cDNA拯救，获救出Ⅺ型新城疫病毒P蛋白突变毒株rF48E9PR386A、rF48E9PK387A，这两株重组病毒毒力明显减弱，同时在鸡胚上具有高滴度、遗传性能稳定，对动物无致病能力，为新一代新城疫疫苗的开发提供了技术支持。
主权项：1.一种Ⅺ型新城疫病毒F48E9的重组拯救病毒制备方法，包括如下操作步骤：（1）Ⅺ型新城疫病毒F48E9基因组全长cDNA转录载体的构建：在质粒pBR322中构建了Ⅺ型NDVF48E9毒株基因组的全长cDNA，质粒命名为pBR322-rF48E9；（2）Ⅺ型新城疫病毒反向遗传系统的建立：根据Ⅺ型NDVF48E9毒株全长感染性克隆载体pBR322-rF48E9的序列，设计构建P蛋白不同氨基酸位点突变为丙氨酸（A）的载体所需引物；构建完成的质粒命名为pBR322-rF48E9P*A；其中，不同氨基酸突变点为386R或387K；（3）Ⅺ型新城疫病毒P蛋白氨基酸点突变重组病毒的制备：将质粒pBR322-rF48E9P*A分别与pCI-NP、pCI-P和pCI-L、pCAGGS-T7共转染BHK-21仓鼠肾细胞，转染后3-4天收集细胞上清液接种9-11日龄SPF鸡胚的尿囊腔，成功收获重组病毒rF48E9PR386A或重组病毒rF48E9PK387A。
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百度查询： 山东省农业科学院家禽研究所(山东省无特定病原鸡研究中心) 一种Ⅺ型新城疫病毒（F48E9）的重组拯救病毒制备方法、重组病毒及应用
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