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摘要：本发明公开了用于单细胞测序的微孔阵列芯片、制备方法及应用方法，应用方法包括分别制备得到大液滴及小液滴，在微孔阵列芯片的入口添加氟化油，将大液滴添加至微孔阵列芯片的入口并倾斜以捕获大液滴，排掉多余液滴后置于冰面上，通过液滴分选仪将细胞液滴分选并添加至所述微孔阵列芯片的大微孔一侧的小微孔中以使细胞液滴与大液滴一一配对，进行电晕处理后加热并再次置于冰面上，将小液滴添加至微孔阵列芯片的入口后再次电晕，对微孔阵列芯片进行密封并水浴加热，注入水溶性缓冲溶液后再次电晕使液滴破乳，收集包含cDNA的溶液。上述方法通过大液滴与细胞液滴及小液滴进行配对融合以实现单细胞测序，提高单细胞mRNA的捕获能力以提高单细胞测序的效率。

主权项：1.一种用于单细胞测序的微孔阵列芯片的应用方法，其特征在于，所述应用方法包括：通过第一液滴生成芯片制备得到大液滴；通过第二液滴生成芯片制备得到小液滴；在微孔阵列芯片的入口及出口处分别连接漏斗形连接头，在所述微孔阵列芯片的入口添加氟化油并置于真空环境内以排空芯片内空气；在所述微孔阵列芯片的入口添加所述大液滴后倾斜所述微孔阵列芯片以使大液滴通过浮力漂流进入所述微孔阵列芯片中的大微孔中；在所述微孔阵列芯片的入口再次添加氟化油以去除多余大液滴；将所述微孔阵列芯片倾斜并置于冰面上，将液滴分选仪的阳性液滴输出口接入所述微孔阵列芯片的入口，以通过所述液滴分选仪将细胞液滴分选并添加至所述微孔阵列芯片的大微孔一侧的小微孔中，以使细胞液滴与大液滴一一配对；在所述微孔阵列芯片的入口再次添加氟化油以去除多余的细胞液滴；使用电晕机在所述微孔阵列芯片上方施加2-4秒钟的电晕处理，以诱导互相接触的大液滴和细胞液滴进行融合；将所述微孔阵列芯片置于常温下20-30分钟以使蛋白酶K充分的裂解细胞、释放细胞的mRNA，之后置于68-75℃的水浴锅中8-12分钟进行蛋白酶K的灭活，之后将微孔阵列芯片置于冰面上；通过所述微孔阵列芯片的入口输入小液滴，使其通过浮力漂流进入所述微孔阵列芯片中的大微孔一侧的小微孔中完成小液滴与大微孔中的液滴间的一一配对，而后通过添加氟化油去除多余的小液滴，使用电晕机在所述微孔阵列芯片上方施加2-4秒钟的电晕处理以使小液滴与大微孔中的液滴进行配对融合；将所述微孔阵列芯片的入口及出口进行密封后，将芯片置于40-45℃水浴锅中进行3小时的反转录反应；通过注射器连接微孔阵列芯片的入口，通过恒流注射泵推动注射器以特定流速推动水溶性缓冲溶液进入所述微孔阵列芯片以排出氟化油，吸取空气及水溶性缓冲溶液再次输入至所述微孔阵列芯片的入口，使用电晕机在所述微孔阵列芯片上方施加2-4秒钟的电晕处理以诱导液滴破乳，静止12-18分钟后，通过所述微孔阵列芯片的出口收集包含cDNA的水溶性缓冲溶液进行测序分析。

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