佛山大学余新刚获国家专利权
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龙图腾网获悉佛山大学申请的专利一种羊源贾第虫PCR-RFLP基因分型方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN117757969B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-25发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202311843111.4,技术领域涉及:C12Q1/6893;该发明授权一种羊源贾第虫PCR-RFLP基因分型方法是由余新刚;王红彩;张浩吉;穆宣儒;袁凯健;李奕龙;许辉设计研发完成,并于2023-12-29向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种羊源贾第虫PCR-RFLP基因分型方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种羊源贾第虫PCR‑RFLP基因分型方法,该方法包括巢式PCR检测引物、特异性内切酶及其反应条件;引物根据十二指肠贾第虫β‑贾第素beta‑giardin,bg基因序列设计,引物序列分别如SEQIDNO:1‑SEQIDNO:4所示,该引物具有较高的特异性和稳定性;所采用的限制性内切酶为HinfI和BglI。本发明建立的基因分型方法可快速、准确鉴定羊源贾第虫的基因型,且适用于贾第虫A型、B型、E型、ABE集聚体混合感染、AB集聚体混合感染、AE集聚体混合感染、BE集聚体混合感染的检测,比基因测序更节约检测成本和检测时间,且一般实验室均具备条件,可广泛应用于羊源贾第虫的基因分型和分子流行病学调查。
本发明授权一种羊源贾第虫PCR-RFLP基因分型方法在权利要求书中公布了:1.一种羊源贾第虫PCR-RFLP基因分型方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、取羊粪便,使用粪便DNA提取试剂盒提取贾第虫DNA;S2、以提取的贾第虫DNA为初始模板,利用设计的如SEQIDNO:1-SEQIDNO:4所示的引物进行巢式PCR扩增贾第虫β-贾第素bg基因;S3、将巢式PCR扩增产物在1%琼脂糖凝胶电泳上进行检测,然后在蓝光切胶仪上切下目的片段,使用胶回收试剂盒进行纯化,得到纯化的bg基因的产物;S4、将纯化的bg基因产物与pMD18-T克隆载体连接,得到连接产物;S5、利用连接产物和感受态细胞DH5α构建重组质粒样品;S6、在超净工作台中,用枪头挑取重组质粒样品的白色单克隆菌落,接种于5mL含Amp抗性的LB液体培养基中,37℃,220rpm培养6-8h,取1μL培养过的菌液作为模板,利用设计的如SEQIDNO:3-SEQIDNO:4所示的引物进行PCR扩增,得到PCR产物;S7、选用HinfI和BglI限制性内切酶对PCR产物进行双酶切后,在1%琼脂糖凝胶电泳上进行检测,取出凝胶,并于紫外透射仪中观察酶切后基因片段,得到贾第虫基因型,贾第虫基因型为A型、B型、E型集聚体或ABE混合型、AB混合型、AE混合型、BE混合型集聚体。
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