恭喜卡瑞济(北京)生命科技有限公司;卡瑞济(北京)健康咨询有限公司钟晓松获国家专利权
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龙图腾网恭喜卡瑞济(北京)生命科技有限公司;卡瑞济(北京)健康咨询有限公司申请的专利一种提高CAR-T细胞群持久性的培养方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119351343B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-28发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411908200.7,技术领域涉及:C12N5/10;该发明授权一种提高CAR-T细胞群持久性的培养方法是由钟晓松;白玥;廉小婧设计研发完成,并于2024-12-24向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种提高CAR-T细胞群持久性的培养方法在说明书摘要公布了:本发明涉及细胞培养技术领域,具体涉及一种提高CAR‑T细胞群持久性的培养方法,所述培养方法为将CAR‑T细胞用CAR‑T细胞培养基进行培养,所述CAR‑T细胞培养基以LONZAX‑VIVO15无血清培养基作为基础组分,还包括如下组成的成分:细胞因子微囊2gL、发酵复合物4gL、硫酸葡聚糖20mgL、维生素C2mgmL、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸15mM和氨基酸1.75mM。各组分协同发挥作用,共同提供CAR‑T细胞营养基质,获得的细胞增殖能力更强、杀伤活力更大的肿瘤杀伤细胞群,使得培养出的CAR‑T细胞,增殖率高,杀瘤活性强,提高疗效,有效提高持久性。
本发明授权一种提高CAR-T细胞群持久性的培养方法在权利要求书中公布了:1.一种提高CAR-T细胞群持久性的培养方法,其特征在于,包括以下步骤:S1:CAR-T细胞用CAR-T细胞培养基重悬,调整接种密度1×106cellsmL,加入与细胞同等数量的anti-CD3CD28磁珠混匀,放入5%CO2、37℃培养箱中培养;S2:步骤S1培养72h后补加CAR-T细胞培养基,至细胞密度为5×105cellsmL,继续于5%CO2、37℃培养箱中培养;S3:步骤S2培养后每3天补加CAR-T细胞培养基一次,保持细胞密度在5×105cellsmL;所述CAR-T细胞为靶向CD19的CAR-T细胞;所述CAR-T细胞培养基以LONZAX-VIVO15无血清培养基作为基础组分,所述LONZAX-VIVO15无血清培养基中还包括如下组成的成分:细胞因子微囊2gL、发酵复合物4gL、硫酸葡聚糖20mgL、维生素C2mgmL、4-羟乙基哌嗪乙磺酸15mM和氨基酸1.75mM;所述氨基酸为L-精氨酸1.2mM、L-天冬酰胺0.2mM、L-半胱氨酸0.2mM、L-谷氨酸0.15mM;所述细胞因子微囊的制备方法,包括以下步骤:1将聚乳酸-羟基乙酸共聚物加入二氯甲烷中混合均匀,获得聚合物溶液;将IL-2和IL-4加入去离子水中混合均匀,获得水相溶液;将水相溶液持续缓慢加入聚合物溶液中,超声,加入到10gL的聚乙烯醇水溶液中,超声,加入0.5gL的聚乙烯醇水溶液中,减压,搅拌,离心,沉淀用去离子水洗涤,冷冻干燥,得到初级微囊;2将木质素和盐酸多巴胺溶于Tris-HCl缓冲液中,加入过硫酸铵和过氧化氢,搅拌,取上层清液透析,冷冻干燥,得到木质素-聚多巴胺;3将步骤2所得木质素-聚多巴胺与氢氧化钠溶液混匀,加入步骤1所得初级微囊,超声,离心,沉淀用去离子水洗涤,冷冻干燥,得到细胞因子微囊;所述发酵复合物的制备方法,包括以下步骤:a将黄芪、牛蒡根、极大螺旋藻和鹰嘴豆洗净后烘干,粉碎过筛,加去离子水混匀,灭菌,得到发酵底物;b将活化后的短双歧杆菌、肉桂链霉菌接种至步骤a所述发酵底物中,培养,离心,固液分离,得到沉淀和上清液;所述短双歧杆菌和肉桂链霉菌购自中国普通微生物菌种保藏管理中心,编号分别为CGMCC1.3001和CGMCC4.6972;c将步骤b所得沉淀干燥,将干燥后沉淀加入乙醇溶液中,浸泡后,超声,抽滤,得到滤液;d将步骤b所得上清液和步骤c所得滤液混合均匀,灭菌,过滤,旋转蒸发,冷冻干燥,得到发酵复合物。
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