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龙图腾网恭喜中国科学院水生生物研究所申请的专利一种多靶位点基因组编辑获得原代100%基因突变黄鳝的方法及应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115896176B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-04-04发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211684347.3，技术领域涉及：C12N15/85；该发明授权一种多靶位点基因组编辑获得原代100%基因突变黄鳝的方法及应用是由宋焱龙;侯明喜;陶彬彬;陈戟;罗红瑞;胡炜设计研发完成，并于2022-12-27向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种多靶位点基因组编辑获得原代100%基因突变黄鳝的方法及应用在说明书摘要公布了：本发明属于水产动物基因功能研究和遗传育种技术领域，公开了一种多靶位点基因组编辑获得原代100%基因突变黄鳝的方法及应用，其步骤：A：目标基因内多个编辑位点的设计与sgRNA合成；B：多靶位点sgRNA与Cas9蛋白共同显微注射到黄鳝受精卵；C：基因组编辑黄鳝筛选，获得目标基因100%突变的黄鳝个体。方法易行，操作简便，将目标基因内的多个位点同时编辑获得多种突变类型，以实现基因功能的完全缺失。该方法可以直接获得原代目标基因100%突变的黄鳝个体，能有效应用于黄鳝遗传育种和基因功能研究，具有重要的应用价值。

本发明授权一种多靶位点基因组编辑获得原代100%基因突变黄鳝的方法及应用在权利要求书中公布了：1.一种多靶位点基因组编辑获得原代100%基因突变黄鳝的方法，包括以下步骤：（1）目标基因内多编辑位点的设计：针对野生型黄鳝cyp19a1a基因的目标编辑区域选取了7个基因组编辑位点，如下：Targeta：GGCAGTAGTTCCTGTTGGTTTGGTargetb：GGATGCAGCAGCGGCAGACCTGGTargetc：GGGATCAGCGGGCATCTCAGTGGTargetd：GGACATTACACTTCACGTTTGGGTargete：GGGGTTGCAGCAGACAGTGGAGGTargetf：GGACCTGTGAGGGCTGACACAGGTargetg：GGTTCCAGGTGACCAGCAGCAGG；所述的目标编辑区域的序列为SEQIDNO.1所示，（2）基因编辑sgRNA合成与显微注射：体外转录合成步骤（1）中的靶位点的sgRNA,等浓度的多种sgRNA与Cas9蛋白显微注射到黄鳝受精卵；（3）目标基因100%突变黄鳝个体的筛选：基因编辑黄鳝经胚胎孵化、幼鱼培育、成鱼养殖获得基因突变个体，取尾部肌肉组织抽提基因组DNA,PCR扩增目标基因DNA片段，对步骤（1）中的目标编辑区域进行测序，目标编辑区域突变成SEQIDNO.2~SEQIDNO.4之一的，即为PO代无卵巢结构的转基因黄鳝。

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