恭喜南京农业大学三亚研究院;歌瑞谱生物科技(南京)有限公司;南京农业大学;浙江省亚热带作物研究所;山东省烟台市农业科学研究院房经贵获国家专利权
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龙图腾网恭喜南京农业大学三亚研究院;歌瑞谱生物科技(南京)有限公司;南京农业大学;浙江省亚热带作物研究所;山东省烟台市农业科学研究院申请的专利一种利用SSR指纹制作葡萄品种DNA分子身份证的方法及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119040511B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-04-08发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411515750.2,技术领域涉及:C12Q1/6895;该发明授权一种利用SSR指纹制作葡萄品种DNA分子身份证的方法及其应用是由房经贵;王亚宁;张瑞;李飞跃;宋洋;唐美玲;薛倩设计研发完成,并于2024-10-29向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种利用SSR指纹制作葡萄品种DNA分子身份证的方法及其应用在说明书摘要公布了:本发明涉及一种利用SSR指纹制作葡萄品种DNA分子身份证的方法及其应用;本发明随机开发一定数量的SSR标记引物,并进一步筛选出指纹清晰、多态性高的引物用于扩增葡萄品种的指纹图谱,再根据其谱带有无利用0‑1矩阵信息开发出能够满足精准鉴定应用的葡萄品种的DNA分子身份证。本发明还将Excel和Heatmap应用到品种快速精准鉴定技术中,通过DNA指纹数据分析比较和快速检索,大大提高了DNA指纹转化效率,具有使用成本低、操作快速、简单、高效、精准和的特点,不仅可以克服传统形态鉴定措施对大量品种精准鉴定的不足,而且方便用于葡萄品种的快速高效鉴定及新品种产权保护,可大大提高种质资源的保存与管理的效率。
本发明授权一种利用SSR指纹制作葡萄品种DNA分子身份证的方法及其应用在权利要求书中公布了:1.一种用于葡萄未知品种鉴定的方法,其特征在于,将Excel统计的0-1矩阵以二维数组的形导入TBtools,以此构建HeatMap层次聚类热图进行可视化品种鉴定,具体如下:(1)使用MISA工具,基于葡萄全基因组随机设计开发SSR引物序列;(2)采集葡萄品种资源的嫩叶作为植物材料,提取样品基因组DNA;(3)随机选取8-10份样本DNA为扩增模板,使用步骤(1)中SSR引物进行PCR扩增,对引物进行初步筛选,筛选条带清晰且品种间具有多态性的引物,每对引物的每条带单独作为一个特异性位点,筛选出的排序好的引物序列如SEQIDNo:1~20所示;(4)用SEQIDNo:1~20所示的引物组合对葡萄品种资源样本依次进行PCR检测;(5)通过聚丙烯酰胺凝胶电泳检测PCR扩增结果,获得葡萄品种资源的DNA指纹;(6)将品种资源的DNA指纹中多态性带转化为0-1矩阵:行列依次为不同样品,纵列依次为排序好的引物位点,统计不同位点位置不同品种扩增出的目的条带信息,其中有条带记为“1”,无条带记为“0”;(7)使用Excel-concat数据合并公式,将构建好的0-1矩阵行列连起来即为对应品种的资源分子身份证号码;(8)使用CTAB法提取待检测样本基因组DNA;(9)使用SEQIDNo:1~20所示引物序列对未知样本基因组DNA进行PCR扩增;(10)PCR扩增产物通过8%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,统计电泳结果,按照0-1矩阵构建方法在其数据表中依次添加待检测未知样品的0-1矩阵信息;(11)使用TBtools软件,选择Graphics中HeatMapIllustrator模块的HeatMap热图工具,输入步骤3构建的0-1矩阵的二维数组格式信息,点击start,得到初步结果,选择ControlDialog进行热图分析,DistMethod选择欧式距离,进行样品间遗传距离计算,ClusterMethod选择最长距离法进行层次聚类分析,聚类热图得以呈现,实现以各个样品分子身份证号码为数据点的层次聚类;(12)分析HeatMap聚类热图结果:若待检测未知样品与品种资源库中其中一个样本聚在一起且DNA指纹信息完全匹配,则未知样品的真实品种名即为该样本的对应品种;所述葡萄品种选自阿利戈特、阿马斯、艾布林、艾尔威因、爱欧娜、安芸皇后、白比诺、白可列特、白香蕉、白谢希、白羽、拜切尔、北塞魂、蓓蕾玫瑰、碧绿珠、波鲁克斯、布吉苏里、布列沙、赤霞珠、脆峰、脆红、大宝、地拉洼、翡翠玫瑰、丰宝、峰后、峰寿、福司令、高砂、贵妃玫瑰、贵人香、哈米拉克、黑奥林、黑潮、黑峰、黑瑰香、黑后、黑赛必尔、黑万尼西科、红井川、红双味、红香蕉、红义、灰比诺、金星无核、井川、酒白、巨峰、巨鲸和巨玫瑰中的一种或多种。
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