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龙图腾网恭喜南京博雷兹生物科技有限公司申请的专利基于核酸常温等温扩增放大信号系统的均相免疫分析方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN114814194B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-04-22发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210391182.4，技术领域涉及：C12Q1/68；该发明授权基于核酸常温等温扩增放大信号系统的均相免疫分析方法是由王占奎;陈明;杨云华;王敏设计研发完成，并于2022-04-14向国家知识产权局提交的专利申请。

本基于核酸常温等温扩增放大信号系统的均相免疫分析方法在说明书摘要公布了：本发明涉及均相免疫分析技术领域，公开了基于核酸常温等温扩增放大信号系统的均相免疫分析方法，包括以下步骤：合成抗体抗原a‑DNA1偶联物，浓度为：1‑20nM；合成抗体抗原b‑DNA2偶联物，浓度为：1‑20nM；合成背景消除探针DNA3，浓度为：10‑100pM；合成一级引导寡核苷酸引物DNA4，浓度为：10‑100pM；合成信号底物探针DNA5DNA6双链，浓度为：50‑100nM；上述组分混合均匀组成均相免疫分析试剂部分A，常温等温扩增试剂成分组成均相免疫分析试剂部分B，使用过程中依次将两部分与待检测样品充分混匀。本发明可通过样品与检测溶液的直接混合完成目标的检测，无需固体生物识别载体和复杂的清洗、分离步骤，操作简单，成本低廉，较为实用，适合广泛推广和使用。

本发明授权基于核酸常温等温扩增放大信号系统的均相免疫分析方法在权利要求书中公布了：1.基于核酸常温等温扩增放大信号系统的均相免疫分析方法，其特征在于：包括以下步骤：合成抗体抗原a-DNA1偶联物，浓度为：1-20nM；合成抗体抗原b-DNA2偶联物，浓度为：1-20nM；合成背景消除探针DNA3，浓度为：10-100pM；合成一级引导寡核苷酸引物DNA4，浓度为：10-100pM；合成信号底物探针DNA5DNA6双链，浓度为：50-100nM；上述组分混合均匀组成均相免疫分析试剂部分A；同时配制常温等温扩增试剂成分组成均相免疫分析试剂部分B；将含有靶标蛋白的样品溶液与均相免疫分析试剂部分A溶液充分混合，在37℃条件下温育10分钟，此过程中，抗体抗原a-DNA1偶联物和抗体抗原b-DNA2偶联物实现免疫识别反应，靶标蛋白将被抗体抗原a-DNA1偶联物和抗体抗原b-DNA2偶联物识别并形成免疫复合物，DNA1和DNA2距离靠近产生邻位杂交形成杂交链，而背景消除探针DNA3可以防止背景假性杂交；然后加入试剂部分B并充分混匀，在37℃条件下温育10分钟，此过程中，对杂交链进行末端补齐，并在一级引导寡核苷酸引物DNA4作用下进行链置换扩增出大量的二级信号放大寡核苷酸引物，同时二级信号放大寡核苷酸引物置换出底物探针单链，实现检测信号的释放；温育完成后，放入检测仪器，在一定波长的激光激发下发出荧光信号，进行光信号采集，并通过标准曲线换算得到浓度值；所述抗体抗原a-DNA1偶联物和抗体抗原b-DNA2偶联物中，抗体抗原a与DNA1和抗体抗原b与DNA2均通过一段寡聚胸腺嘧啶poly-T进行桥接，所述寡聚胸腺嘧啶poly-T序列长度为15-25个碱基；所述DNA1的3’端通过poly-T桥接后与抗体抗原a偶联，其碱基序列由3’端到5’端依次分为DNA1a、DNA1b、DNA1c三部分，其中DNA1a为邻位杂交核心部分，其序列长度为6-8个碱基，所述DNA2的5’端通过poly-T桥接后与抗体抗原b偶联，其碱基序列由5’端到3’端为DNA2a，且与DNA1a在序列结构上能够碱基互补配对；所述背景消除探针DNA3中间核心序列能够与DNA1a和DNA1b衔接部分序列互补配对，背景消除探针DNA3中间核心序列起到防止假性自杂交作用，其序列长度为8-12个碱基，其5’端和3’端各含有3-5个游离碱基无法与DNA1序列互补配对；所述一级引导寡核苷酸引物DNA4序列能够与DNA1b序列互补配对，进行链置换扩增出DNA1b-DNA1c的互补核酸单链；所述信号底物探针DNA5DNA6双链中，其双链一端序列与DNA1c序列相同或互补，双链另一端的单链5’端和3’端分别标记有荧光基团和荧光淬灭基团。

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