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龙图腾网恭喜上海快序生物科技有限公司申请的专利一种实现高通量蛋白亲和力改造的方法及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119040367B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-04-25发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411246877.9，技术领域涉及：C12N15/70；该发明授权一种实现高通量蛋白亲和力改造的方法及其应用是由朱明;李林竹;闵恬;李毅;马斌设计研发完成，并于2024-09-06向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种实现高通量蛋白亲和力改造的方法及其应用在说明书摘要公布了：本发明提供了一种实现高通量蛋白亲和力改造的方法及其应用，所述方法包括：对编码蛋白序列的质粒的DNA进行随机突变，将突变前后的质粒混合，得到质粒混合物；将质粒混合物转染到细胞中，进行蛋白表达；将蛋白混合物和与其结合的配体孵育，通过富集配体将与配体结合的具有高亲和力的突变蛋白纯化出来；采用质谱分析方法对纯化前后的突变蛋白样品进行检测；采用测序软件对质谱数据进行解析，得到突变蛋白的氨基酸序列及突变蛋白的相对丰度，进而计算出其对应的亲和力。本发明极大的简化了实验流程，提高了蛋白筛选效率，突破了噬菌体展示等蛋白改造技术的限制，适用于所有种类蛋白亲和力的高通量改造。

本发明授权一种实现高通量蛋白亲和力改造的方法及其应用在权利要求书中公布了：1.一种实现高通量蛋白亲和力改造的方法，其特征在于，所述方法包括：（1）对编码抗体序列的质粒的DNA进行随机突变，将突变前后的质粒混合，得到质粒混合物；将质粒混合物转染到受体细胞中，进行抗体蛋白表达；（2）将突变抗体的混合物与含有抗原的固相载体孵育，通过免疫沉淀的方法，将具有高亲和力的抗体富集在固相载体上，之后将固相载体上富集得到的突变抗体洗脱下来；（3）采用质谱分析方法对洗脱前后的突变抗体进行测序；（a）对抗体蛋白进行还原和酶切，得到多肽片段；（b）采用高效液相色谱将多肽片段逐一分离，送进质谱仪进行检测；所述质谱仪的分析方法包括：酶切所得肽段上样到填充有C18填料的反相色谱柱中之后，用95%水，5%乙腈，和0.1%甲酸的溶液进行清洗以除去样品中的盐；而后将装载有肽段样品的色谱柱连接到高效液相色谱仪上，通过1h的梯度洗脱程序将色谱柱上的肽段逐一洗脱下来，送进质谱仪进行检测；质谱仪的喷雾电压设置为3.5kV，HPLC的流速设置为200nLmin，质谱仪设置为数据依赖模式；（4）采用测序软件对质谱数据进行解析，进而得到突变抗体的氨基酸序列及突变抗体的相对丰度，进而计算出其对应的亲和力；所述解析的步骤包括：基于质谱分析得出抗体蛋白的氨基酸序列，根据某一抗体蛋白在免疫沉淀分离前的样品中的所占的比例，与在洗脱后的样品中的所占的比例的大小关系，判断某一抗体蛋白的亲和力升高或降低；若此抗体蛋白在免疫沉淀分离前的样品中的所占的比例小于在洗脱后的样品中的所占的比例，则表明抗体蛋白亲和力升高，此抗体蛋白被富集；若此抗体蛋白在免疫沉淀分离前的样品中的所占的比例大于在洗脱后的样品中的所占的比例，则表明抗体蛋白亲和力降低。

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