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龙图腾网恭喜广东省中医院(广州中医药大学第二附属医院、广州中医药大学第二临床医学院、广东省中医药科学院)申请的专利原发性尿酸代谢异常肾类器官模型制备方法及试剂盒获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN117305221B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-05-06发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202311253354.2，技术领域涉及：C12N5/071；该发明授权原发性尿酸代谢异常肾类器官模型制备方法及试剂盒是由吴寿海;曾湘;毛炜;黎创;徐鹏;卢钊宇;田瑞敏设计研发完成，并于2023-09-26向国家知识产权局提交的专利申请。

本原发性尿酸代谢异常肾类器官模型制备方法及试剂盒在说明书摘要公布了：本发明公开一种原发性尿酸代谢异常肾类器官模型的制备方法及试剂盒。本发明利用含核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的gRNA和Cas9基因的gRNA‑Cas9质粒，以及核苷酸序列如SEQIDNO.2～7所示的引物，基于CRISPRCas9基因同源修复技术构建了含SLC2A9rs16890979的多能干细胞，并将其分化为肾类器官，制得了一种原发性尿酸代谢异常肾类器官模型。通过本发明的方法制得的肾类器官可实现尿酸代谢异常的表型及功能模拟，可作为体外研究尿酸代谢性肾损伤的发病机制及药物筛选的良好的肾类器官模型。

本发明授权原发性尿酸代谢异常肾类器官模型制备方法及试剂盒在权利要求书中公布了：1.原发性尿酸代谢异常肾类器官模型的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）构建用于扩增含SLC2A9rs16890979的修复模板的PCR模板：以胚胎干细胞的DNA为模板，分别以核苷酸序列如SEQIDNO.4~5所示的序列和核苷酸序列如SEQIDNO.6~7所示的序列为引物进行PCR，分别得到上游同源臂和下游同源臂；将上游同源臂和下游同源臂与载体连接，即得用于扩增含SLC2A9rs16890979的修复模板的PCR模板；（2）构建含SLC2A9rs16890979的修复模板：以步骤（1）制得的PCR模板为模板，以核苷酸序列如SEQIDNO.2~3所示的序列为引物进行PCR，得到含SLC2A9rs16890979的修复模板；（3）构建含SLC2A9rs16890979的胚胎干细胞：将gRNA-Cas9质粒和含SLC2A9rs16890979的修复模板共同转染胚胎干细胞，对转染后的细胞进行抗性筛选，然后敲除抗性标记基因，选择存在SLC2A9rs16890979突变的单克隆细胞进行扩大培养，分别得到存在SLC2A9rs16890979杂合突变和纯合突变的胚胎干细胞；其中，所述gRNA-Cas9质粒和含SLC2A9rs16890979的修复模板的摩尔比为1:2~5；所述gRNA-Cas9质粒含靶向SLC2A9rs16890979基因突变点的gRNA和Cas9基因，所述gRNA的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；（4）原发性尿酸代谢异常肾类器官模型的制备：包括如下步骤：（i）将步骤（3）制得的存在SLC2A9rs16890979突变的胚胎干细胞消化后用含3.0~3.5mMY27632、5~10μMCHIR99021和0.1~2mMβ-巯基乙醇的BPEL培养基重悬，然后接种在超低浓度附着板中培养；（ii）培养的第2天，用含5~10μMCHIR99021的BPEL培养基替换一半培养基，继续培养至细胞形成胚状体；（iii）将胚状体用DMEM洗涤，然后再悬浮在StageII培养基中培养至其分化肾类器官；所述StageII培养基以由IMDM培养基和Ham’sF-12nutrientmixture按体积比1:1混合得到的培养基为基础培养基，其组成还包括：10%BSA、3.0~3.5mMY27632、5~10μMCHIR99021、0.1~2mMβ-巯基乙醇、0.5~2%Pencillin-Streptomycin和2~3μgmLPlasmocin。

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