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申请/专利权人：施纯青

摘要：本发明提供一种可用于降低血糖、血脂及降肝脏脂肪的牛樟芝萃取物Ergostatrien-3β-ol医药组成物及其制备方法与用途。其中，该牛樟芝萃取物是自牛樟芝的深层发酵液submerged whole broth提取获得，并透过葡萄糖转运蛋白4GLUT4及磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶p-AMPK，达到降血糖、降低血液总胆固醇、三酸甘油酯、及或降肝脏脂肪的效果。

主权项：一种牛樟芝萃取物，其是自牛樟芝深层发酵液的冻干粉提取的活性物质，其特征在于，该活性物质具有一R基，该R基选自H、其中，当R基为H时，萃取物为活性物质EK100；当R基为时，萃取物为活性物质EK100的衍生物。

全文数据：可用于降低血糖、血脂及降肝脏脂肪的牛樟芝萃取物Ergostatrien-30-ol医药组成物及其制备方法与用途技术领域[0001]本发明关于一种牛樟芝萃取物，特别是指牛樟芝萃取物于制备降低血糖、血脂及或肝脏脂肪的医药组合物的用途。背景技术[0002]流行病学分析业已预测第二型糖尿病患者在2025年时将达到约3亿人口。第二型糖尿病在所有的糖尿病患中占了90%，其特征是高血糖症，具体表现包括胰岛素分泌异常或是在包含脂肪组织、骨骼肌和肝脏组织等周缘组织的胰岛素作用不敏感性，后者又称胰岛素阻抗（insulinresistance，其发生与遗传或环境因素有关，而饮食成分在环境因素中扮演着一关键因素。[0003]葡萄糖运转蛋白4Glucosetransporter4;以下简称为GLUT4是全身葡萄糖体内平衡稳态的关键调节因子，胰岛素或运动会动员GLUT4转位，即GLUT4从细胞内储存腔迀移至脂肪细胞及骨骼肌细胞膜表面，造成细胞摄取葡萄糖。而损害GLUT4表现、GLUT4转移及或胰岛素讯息传导，将影响胰岛素刺激葡萄糖摄取，从而导致胰岛素阻抗及高血糖血症。因此，增强GLUT4表现的治疗策略将能促进抗糖尿病药物的发现。[0004]腺苷单磷酸活化蛋白激酶AMP-activatedproteinkinase，以下简称为AMPK是葡萄糖和脂质代谢的关键调节因子；因为在第二型糖尿病患者中，葡萄糖及脂质代谢是失调的，而AMPK调节剂已被提出对于葡萄糖及脂质代谢失调可达到有效治疗。[0005]牛棒芝（ClitocybenudaorLepistanuda，Antrodiacamphorata，俗名牛棒燕、红樟芝，为多孔菌科Polyporaceae食用真菌，是台湾特有珍贵的药用真菌，寄生于牛樟树中空的内壁上，其子实体常应用于各种疾病的治疗，例如抗肿瘤、保肝、增强免疫力等疾病。野生牛樟芝于民间被宣称具有多样活性及功效，包括解酒、解毒（foodanddrugintoxication、治疗腹泻（diarrhea、腹痛（abdominalpain、治疗高血压hypertension、止痒skinitching、以及抗癌（cancer。目前民间使用上的困难是野生牛樟芝取得不易，数量极为稀少且价格昂贵。目前牛樟芝可以人工培植，有液体发酵、固体培养法、和椴木栽培法。子实体和培养的菌丝体两者都含有脂肪酸、木质素、phenyl衍生物、倍半萜、固醇、三萜化合物。牛樟芝子实体具有免疫调节、抗氧化、和保肝的活性。液体发酵培养液具有抗肿瘤活性。培养的菌丝体具有抗发炎作用、血管松弛、和抗肿瘤活性。液体发酵培养液对四氯化碳诱导的大鼠具有保肝的活性。除此之外，牛樟芝的子实体对部分癌症也有抑制效果，因此，也同时有药用，或开发成为防癌、抗癌健康食品的价值。[0006]然而，作为从牛樟芝的深层发酵液中获得的有效活性成分之一的Ergostatrien-30-〇lEKlOO,以下简称为EK100及其衍生物，目前对于降低经由高脂饮食引起的糖尿病的血糖、血脂控制以及改善脂肪肝的功效则未知。发明内容[0007]本发明的第一目的在于开发牛樟芝萃取物的活性物质EK100及其衍生物的新用途，尤其是用于制备降低血糖，或应用于预防或治疗糖尿病的医药化合物。[0008]本发明的第二目的在于开发牛樟芝萃取物的活性物质EK100及其衍生物的新用途，尤其是用于制备降低血液脂质、或总胆固醇（totalcholesterol，以下简称为TC或三酸甘油酯triglyceride，以下简称为TG的医药化合物。[0009]本发明的第三目的在于开发牛樟芝萃取物的活性物质EK100及其衍生物的新用途，尤其是用于制备增加血液的高密度脂蛋白的医药化合物。[0010]本发明的第四目的在于开发牛樟芝萃取物的活性物质EK100及其衍生物的新用途，尤其是用于制备降低肝脏的脂质或三酸甘油酯的医药化合物。[0011]本发明的第五目的在于开发牛樟芝萃取物的活性物质EK100及其衍生物的新用途，尤其是用于制备降低肝细胞空泡样变现象（ballooningdegenerationofhepatocyte的医药化合物。[0012]本发明的第六目的在于开发牛樟芝萃取物的活性物质EK100及其衍生物的新用途，尤其是用于制备增加骨骼肌的磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶phospho-AMPK，以下简称为p-AMPK、磷酸化蛋白质激酶Bphospho_Akt，以下简称为p-Akt以及葡萄糖转运蛋白4GLUT4的医药化合物。[0013]本发明的第七目的在于开发牛樟芝萃取物的活性物质EK100及其衍生物的新用途，尤其是用于制备改善肝藏内的磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶P-AMPK及或改善骨骼肌蛋白质激酶B磷酸化p-Akt，并提升胰岛性敏感性的医药化合物。[0014]其中，本发明提供一种牛樟芝萃取物，其是自牛樟芝深层发酵液的冻干粉提取的活性物质EK100Ergostatrien-3f3-〇l及其衍生物;其中，该活性物质EK100及其衍生物是将牛樟芝深层发酵液的冻干粉以甲醇在室温下萃取三次;令该甲醇萃取液在真空中蒸发，得到棕色残留物;将该棕色残留物悬浮于纯水中，利用乙酸乙酯将的分离出一混合物;将该混合物在硅胶上进行层析，利用己烷与乙酸乙酯的混合物洗提以增加极性，再以高效液相色谱法纯化后制得一产物，将该产物经含有10%乙酸乙酯的己烷溶液洗提，并用乙醇进行重结晶后所制得。[0015]如此，透过该由牛樟芝萃取物中的活性物质EK100及其衍生物，使高脂饮食诱发的胰岛素阻抗以及高血脂症，经施予活性物质EK100及其衍生物后，达到以下功效：[0016]1使血糖、糖化血色素（glycatedhemoglobin，以下简称为HbAlc、总胆固醇TC、三酸甘油酯TG、胰岛素及瘦体素等血液数值明显下降且最终改善胰岛素阻抗；[0017]2降低肝脏空泡样变ballooningdegeneration以及内脏脂肪细胞尺寸（theaverageareasofadipocytes；[0018]3使骨胳肌中的葡萄糖转运蛋白4GLUT4及磷酸化蛋白质激酶Bp-Akt蛋白表现量显著地增加；[0019]4使骨胳肌及肝脏中的磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶phospho-AMPK蛋白表现量显著增加；[0020]5降低肝脏磷酸稀醇式丙酮酸駿激酶？1108口110611〇]^71'11¥&七6〇&1'13«5^；[11&86，以下简称为PEPCK及6-磷酸葡萄糖glucose-6-phosphatase，以下简称为G6_Pase的表现并降低葡萄糖生成；[0021]6活性物质EK100及其衍生物通过减少胆固醇调节组件结合蛋白lcster〇lregulatoryelementbindingprotein-lc，以下简称为SREBP-lc但增加过氧化物酶体增殖物活化受体aperoxisomepro1iferator-activatedreceptora，以下简称为PPARa的表现量，来抑制肝脏脂肪酸合成及增加脂肪酸的氧化，而达到降低血液中三酸甘油酯的功效；[0022]7胆固醇调节组件结合蛋白2sterolregulatoryelementbindingprotein-2,以下简称为SREBP-2在胆固醇合成的调节中扮演重要角色，活性物质EK100及其衍生物透过使肝脏SREBP-2的表现下降，达到降低血液中总胆固醇；[0023]8活性物质EK100及其衍生物透过增加脂蛋白元A-KapolipoproteinA-I，以下简称为apoA-I在肝细胞的表现，而提高高密度脂蛋白胆固醇（high-densitylipoproteincholesterol，以下简称为HDL-C的浓度。apoA-I作为HDL-C中的主要载脂蛋白，流行病学的研究证实：提高血浆ap〇A-I的浓度，可能介导了HDL-C对抗冠状心脏血管疾病发展的作用；因此，本发明活性物质EK100及其衍生物具有效对抗冠状心脏血管疾病发展的功效；[0024]9活性物质EK100及其衍生物具有调节GLUT4、PEPCK、G6-Pase、SREBP-lc、SREBP-2、apoA-I及p-AMPK的功效，而具有治疗第二型糖尿病及与其相关的高血脂症的潜力；[0025]10活性物质EK100及其衍生物是提取自牛樟芝的成分，达到提供一种用于治疗糖尿病的高安全性、低毒性的药品有效成分替代物。附图说明[0026]图1是牛樟芝萃取物的活性物质EK100及其衍生物的化学结构式。[0027]图2A显示本发明动物实验中各组小鼠体重的曲线图。[0028]图2B至图2H显示本发明动物实验中各组小鼠在食物摄取量（图2B、内脏脂肪重量图2C、血糖值（图2D、血液总胆固醇浓度（图2E、血液三酸甘油酯浓度（图2F、血液瘦素浓度（图2G、血液胰岛素浓度（图2H的直方图。[0029]图3A显示本发明动物实验中各组小鼠的附睾白色脂肪组织的病理切片图。[0030]图3B显示本发明动物实验中各组小鼠的肝组织的病理切片图。[0031]图4A显示本发明动物实验中各组小鼠肝脏组织中的PEPCK、G6-Pase、adiponectinnSREBP-1cnDGAT2acyl-coenzymeA:diacylglycerolacyltransferase2、apoC-III、SREBP-2、apoA-I、PPARalpha、GAPDH表现进行半定量RT-PCR分析的数据图式。[0032]图4B至图4D显示将图4A中的PEPCK、G6-Pase、adiponectin、SREBP-lc、DGAT2、apoC-III、SREBP-2、apoA-I、PPARa、GAPDH测得的信号经图像分析而定量，且透过GAPDH使每个值标准化。[0033]图5A显示本发明动物实验中各组小鼠，以西方点墨分析法Westernblot测定各骨胳肌中的GLUT4、phosph〇-AMPKThrl72total-AMPKThrl72、phosph〇-AktSer473total-AktSer473的蛋白质含量，以及肝脏中的phosph〇-AMPKThrl72total_AMPKThrl72的蛋白质含量。[0034]图5B显示将图5A测得的蛋白质含量的定量直方图。[0035]图6显示本发明活性物质EK100的提取方法流程图。具体实施方式[0036]本发明特征与优点的一些典型实施例将在以下说明中详细叙述。应理解的是本发明能够在不同的态样上具有各种的变化，然其皆不脱离本发明的范围，且其中的说明及图式在本质上是当作说明之用，而非用于限制本发明。[0037]本发明提供了牛樟芝萃取物的活性物质EK100及其衍生物用于制备降低血糖、肝脏脂质、三酸甘油酯以及治疗糖尿病的医药化合物的新用途。以下将进一步说明牛樟芝萃取物的提取方法及其功效试验。[0038]本发明的牛樟芝萃取物是指从牛樟芝深层发酵液的冻干粉提取的单一成分:活性物质EKlOOErgostatrien-30_ol及其衍生物。请配合参阅图6所示，本发明活性物质EK100的具体提取方法，是将1.6kg的牛樟芝深层发酵液的冻干粉，以16公升的甲醇在室温下萃取三次，每次萃取一天。该甲醇萃取液在真空中蒸发，得到棕色残留物，将该棕色残留物悬浮于1公升的纯水中，然后用1公升的乙酸乙酯分三次将其分离出一混合物。将乙酸乙酯分率95克），在硅胶上进行层析，并用己烷与乙酸乙酯的混合物洗提，用以增加极性并以高效液相色谱法（highperformanceliquidchromatography，简称HPLC进一步纯化。将初提取出的活性物质EK100或其衍生物5.4克）产物，以含有10%乙酸乙酯的己烷溶液洗提，并用乙醇进行重结晶。[0039]如图1所示，显示本发明牛樟芝萃取物的化学结构式，其中，该萃取物具有一R基，该R基是选自H其中，当R基为H时，萃取物为活性物质EK100ergostatrien-30-ol;当R基为《时，萃取物为活性物质EK100的衍生物。[0040]罗格列酮（rosiglitazone，以下简称为Rosi为ThiazolidinedionesTZDs类抗糖尿病药物之一，其是过氧化体增殖活化受体yperoxisomeproliferator-activatedreceptoryagonists，以下简称为PPARy的亲合剂。这类型的PPARy亲合剂可降低血糖值;罗格列酮不会刺激胰岛素分泌，而是透过直接靶向胰岛素阻抗和增加外周葡萄糖摄取，达到改善第二型糖尿病患的血糖控制，罗格列酮的作用方式主要促成胰岛素增敏效果和增加GLUT4蛋白质含量。[0041]药品非诺贝特Fenofibrate，以下简称为Feno是一种PPARa的活化剂，并在高三酸甘油酯血症的治疗上行的多年。PPARa是与脂质代谢相关的基因的关键调节因子，其通过参与调节脂质生成、脂肪酸氧化、能量消耗等许多靶基因，导血液三酸甘油酯和脂肪酸的减少。[0042]对C57BL6J小鼠进行高脂饮食对于建立早期第二型糖尿病是强大且有效的模型。C57BL6J小鼠在高脂饮食的诱导下，不仅明显增加脂肪组织的体积，也产生明显的胰岛素阻阻抗、高血脂症、高胰岛素血症、高三酸甘油酯以及高胆固醇血症。二甲双胍Metformin是目前相当普遍用于治疗第二型糖尿病的抗糖尿病药品，其能够激活肝脏及骨骼肌中的AMPK;虽然二甲双胍会导致包括乳酸性酸中毒的副作用，但仍被认为对第一型和第二型糖尿病的治疗潜力。罗格列酮则是透过不同于二甲双胍的讯息路径达到激活AMPK的目的；并且罗格列酮也对脂肪激素的血浆浓度有影响，还会减少肝脏累积及改善胰岛素阻抗有关，因此，罗格列酮被选为正对照组，用于评估EK100及其衍生物的抗糖尿疗效与作用的对照药物。a次元Thrl72的磷酸化对AMPK的激活作用是必要的，所以本发明选择高脂饮食小鼠模型来探讨EK100及其衍生物对于抗糖尿病及抗高血脂方面进行了研究，包括AMPK激活、GLUT4含量。作为EK100及其衍生物可能的分子机转，也分析对周边组织的标靶基因表现量的影响，并且以与罗格列酮及非诺贝特为对照药物。[0043]以下说明本发明于测试牛樟芝萃取物的活性物质EK100及其衍生物用于预防或治疗糖尿病的功效的动物和实验设计，以及小鼠的血液数据、血清生化值分析、病理组织分析、肝脂质分析与RNA的萃取及mRNA的相对定量目标基因表现量。[0044]动物和实验设计[0045]在第二型糖尿病动物实验中，是采用4周龄C57BL6J鼠（购自国家实验研究院实验动物中心），饲养室温度控制在22±3°C，湿度60±5%，维持12小时光照（7:00~19:00，在调适一周后，小鼠开始一项为期12周的实验。首先，将小鼠随机分组分成两组，其一为控制组（controlgroup，简称⑶N，具有9只小鼠接受低脂饮食喂养（Diet12450B,ResearchDiets,Inc.,NewBrunswick,NJ,USA，其二为高脂饮食组（high-fatdietgroup，简称HF，具有54只小鼠接受脂肪含量达45%的高脂饮食喂养Diet12451，ResearchDiets,Inc.，NewBrunswick，NJ，USA〇[0046]经过8周的饮食诱导，将高脂饮食组小鼠进一步以每组9只小鼠随机地分为6组，在最后4周里，保持高脂饮食并每天以经口灌胃方式，分组给予EK10010、20、40mgkgdaybodywt、非诺贝特Feno;购自西格玛化工有限公司，圣路易斯，管理剂量于250mgkgdaybodywt、罗格列酮（rosiglitazone，简称Rosi;l%甲基纤维素，10mgkgbodyweight,取自葛兰素史克GlaxoSmithKline公司，编号：BRL49653C的产品）或水（vehicle。其中，控制组及高脂饮食控制组只喂食水。前述低脂饮食的总热量中包括10%kcal的脂肪含量，其他热量组成包括20%蛋白质、70%碳水化合物，而高脂饮食则在总热量中包括45%kcal的脂肪含量，其他热量组成包括20%蛋白质、35%碳水化合物。[0047]在实验最后，移开食物将小鼠从晚上十点至早上十点禁食，隔天将小鼠牺牲，收集血液和组织以用于分析。取下肝脏、骨骼肌并称重，接着立即冻结，并保持在_80°C下以用于标靶基因的分析。将肝素（30单位毫升）（Sigma加入到血液样本。收集血液样本动作于30分钟内完成。血浆样本在4°C、1600g下离心15分钟，藉此获得用于测定血浆胰岛素和瘦素的浓度。[0048]血液数值分析[0049]从禁食小鼠的眶后窦收集血液样本0.8毫升），并利用葡萄糖分析仪Model1500sidekickglucoseanalyzer;YSI分析葡萄糖水平。透过商业可取得的HbAlc试剂盒BioSystemsS•A•，Barcelona，Spain测得HbAlc百分比。对血液三酸甘油酯（Plasmatriglycerides，TG、总胆固醇TC、游离脂肪酸freefattyacids，简称FFA、高密度脂蛋白胆固醇HDL-C以及低密度脂蛋白胆固醇（lowdensitylipoproteincholesterol，以下简称为LDL-C等，是利用商业可取得的测定试剂盒并依其指示进行测试甘油三酯-E测试Triglycerides-Etest、胆固醇-E测试Cholesterol-Etest及游离脂肪酸-C测试FFA-Ctest;和光纯药WakoPureChemical，日本大阪；高密度脂蛋白胆固醇测试HDL-C-test及低密度脂蛋白胆固醇LDL-C-test，罗氏诊断有限公司RocheDiagnosticsGmbH，印第安纳波利斯，美国）。血液中胰岛素水平和瘦体素水平则是透过酶联免疫吸附试验又称酵素免疫分析法，Enzyme-1inkedimmunosorbentassay，简称ELISA并使用市售试剂盒根据制造商指示进行测定小鼠胰岛素ELISA试剂盒，Sibayagi，日本群马县;小鼠瘦体素ELISA试剂盒，森永，日本横滨）。[0050]病理组织分析[0051]将收集到的一部分附睾白色脂肪组织和肝组织，用福尔马林200gkg中性缓冲溶液固定并和包埋在石蜡中，将组织剖面8wii以苏木精和曙红染红，以用于显微镜检查。使用显微镜莱卡，DM2500进行显微镜检查，并使用莱卡数字相机DFC-425-C拍摄组织切片图像。[0052]肝脂质的分析[0053]取得动物实验各组小鼠的肝脏。用lmL的蒸馏水均化0.375克的肝脏5分钟，以提取肝脂质，再使用甘油三酯试剂盒进行血清脂质分析。[0054]RNA的萃取及mRNA的相对定量显示基因表现[0055]根据制造商的指示，利用Trizol试剂Trizolreagent分离来自肝脏组织的总RNA分子研究中心公司，辛辛那提，美国俄亥俄州）。透过2%琼脂糖凝胶电泳对前述提取的总RNA完整性进行检测，并通过2%琼脂糖凝胶电泳以及260和280nm的紫外线吸亮度测定RNA浓度分光亮度计U-2800A，日立）。总RNAlyg反转录为cDNA，以及5mL的莫罗尼鼠白血病病毒如前述方案反转录为酶震中，麦迪逊，WI，USA。聚合酶链反应是在最后的25yL中进行，其含有1U的BlendTaq-PlusT0Y0B0公司，日本）、1此的RT第一链cDNA产物、各10處的正向引子和反向引子、75mM的Tris-HCl三羟甲基氨基甲烷盐酸盐其中含有lmgL的吐温20tween-20，pH值为8•3，又称：聚氧乙稀山梨糖醇酐单月桂酸酯）、2•5mM的dNTPdeoxy-ribonucleosidetriphosphate，脱氧核糖核苷三磷酸）以及2mM的MgC12氯化镁）。所述引子如下表1所示。该产物是在2%琼脂糖凝胶上进行测定，并用溴化乙锭（ethidiumbromide染色。[0056][0057][0058]以下说明前述测试中，本发明动物实验中，高脂肪饮食诱导致糖尿病的C57BL6J小鼠的结果，包括各组小鼠在体重（图2A、食物摄取量（图2B、内脏脂肪重量（图2C、血糖值图2D、血液总胆固醇浓度（图2E、血液三酸甘油酯浓度（图2F、血液瘦素浓度（图2G、血液胰岛素浓度（图2H、附睾白色脂肪组织肝脏组织的病理切片（图3A、图3B、小鼠肝脏组织中的PEPCK、G6-Pase、adiponectin、SREBP-lc、DGAT2、apoC-III、SREBP-2、apoA-I、PPARa、GAPDH表现进行半定量RT-PCR分析（图4A、图4B以及不同组织如肝脏及骨骼肌的标靶基因表现量或蛋白质的含量，包括对p-AMPKThrl72total-AMPK、GLUT4、p-AktSer473total-Akt的影响（图5A、图5B。[0059]如图2A及表2所示，实验开始各组小鼠具有相近的体重，约18.9±0.2g。在实验的12周中，高脂饮食组HF小鼠的体重及体重增加量相较于控制组C0N显著地增加。[0060][0061][0062]如图2B至图2H及表2,显示喂食不同剂量的活性物质EK100、Feno或Rosi对于高脂饮食诱导第二型糖尿病鼠的肝脂质及血液数值分析结果，其中Control表示低脂饮食对照组，HF表示高脂饮食对照组（赋形剂（vehicle-treated对照组），HF+K1、HF+K2、HF+K3分别表示服用不同剂量的活性物质EK100的实验组，而HF+Feno表示服用高脂饮食和药品非诺贝特（Fenofibrate，Feno的实验组，HF+Rosi表示服用高脂饮食和药品罗格列酮rosiglitazone，Rosi的实验组。井号是相较于C0N组的统计分析，其中，#表示P〈0.05、##表示P〈0.01、###表示P〈0.001，而星号是相较于HF组的统计分析，其中，*表示P〈0.05、**表示P〈0•01、***表示P〈0•001。[0063]如图2A及表2所示，实验开始各组小鼠具有相近的体重，约18.9±0.2g。在实验的第12周中，高脂饮食组HFD小鼠的体重及体重增加量增加量相较于控制组C0N显著地增加。图2B显示，HF+K3组及HF+Feno组显著降低体重增加量增加量。图2C及表2显示，高脂饮食小鼠显著增加脂肪组织包括附睾、内脏脂肪、肠系膜及腹膜后白色脂肪组织）的重量。表2并显示，HF+K1组、HF+K2组、HF+K3组、HF+Feno组及HF+Rosi组显著降低小鼠的腹膜后白色脂肪组织和内脏脂肪的重量;HF+K1组、HF+K2组、HF+K3组、HF+Rosi组显著降低附睾脂肪的重量;HF+K3组及HF+Rosi组显著降低肠系膜的重量;HF+K2组、HF+K3组及HF+Feno组显著降低棕色脂肪组织BAT的重量;HF+K2组、HF+K3组显著增加骨骼肌的重量;HF+Feno组显著增加肝脏的重量。[0064]经过12周高脂饮食喂养，高脂饮食组小鼠相较于控制组小鼠显现了高血糖的表现卩〈0.001。其中，如图20，册+11组、册+12组、册+13组、册+?611〇组及册+1?〇81组的血糖水平明显地下降（依前述组排序为P〈〇.001、P〈〇.001、P〈〇.001、P〈〇.001、P〈〇.001。表2显示，血红蛋白的百分比经无酶催化HbAlc百分比）为整体测量长期的血糖调节的评估方法。HF组的HbAlc的血液数值明显地高于C0N组;HF+K1组、HF+K2组、HF+K3组、HF+Feno组及HF+Rosi组显示血液中HbAlc数值显著下降。[0065]图2E、图2F及表2显示，高脂饮食造成血液中总胆固醇、三酸甘油酯、血浆游离脂肪酸增加。其中，HF+K1组、HF+K2组、HF+K3组及HF+Rosi组显著降低小鼠的胆固醇数值依前述组排序为？〈0.05、？〈0.01、？〈0.001、？〈0.05;册+11组、册+12组、册+13组、册+?611。组、册+Rosi组显著降低小鼠的三酸甘油酯及血浆游离脂肪酸浓度;HF+K1组、HF+K2组、HF+K3组及HF+Feno组小鼠的HDL-C数值增加;HF+K3组及HF+Rosi组小鼠显示LDL-C数值下降；由高脂饮食导致增加的肝脂质总量与三酸甘油酯浓度，在HF+K1组、HF+K2组、HF+K3组、HF+Feno组及HF+Rosi组中皆明显下降而获得显著地改善。[0066]图2G及图2H显示，HF组的血液瘦素浓度及胰岛素浓度远高于C0N组，其中，HF+K1组、HF+K2组、HF+K3组、HF+Feno组及HF+Rosi组小鼠的血瘦素及胰岛素水平明显地下降低。[0067]图3A显示，高脂饮食喂食会造成小鼠的脂肪细胞肥大，如图，HF组及C0N组的脂肪细胞平均面积分别为9604.2±281.3及3797.5±412.9_2，其中，册+11组为4204.0±131.5Mi2、HF+K2组为3535•7±340•2_2、HF+K3组为3458•9±30•7_2、HF+Feno组为4175•4土322.9mi2，显示该些组的脂肪细胞肥大现象较不明显;而HF+Rosi组的脂肪细胞平均面积则为5598.6±162.7wn2。图3B显示，高脂饮食喂食会造成小鼠的肝细胞空泡样变，但在HF+K1组、HF+K2组、HF+K3组、HF+Feno组及HF+Rosi组中，空泡样变现象减少而获得改善。[0068]图4A及图4B显示，高脂饮食诱导致PEPCK、G6-Pase、SREBP-lc、DGAT2、apoC-III&SREBP-2的mRNA表现量显著高于CON组。其中，HF+K1组、HF+K2组、HF+K3组、HF+Feno组及HF+Rosi组显著降低小鼠的？£?〇、66^^86、51^8?-13、064了2、3口〇：-111及51^8?-2表现量;册+K3组及HF+Rosi组显著增加小鼠的脂联素的表现量;HF+K1组、HF+K2组、HF+K3组显著增加小鼠的apoA-I的基因表现量;HF+K1组、HF+K2组、HF+K3组及HF+Feno组显著增加小鼠的PPARa表现量。[0069]图5A及图5B显示，HF组小鼠的GLUT4、p-Akt总Akt水平低于C0N组小鼠；其中，HF+K1组、HF+K2组、HF+K3组、HF+Feno组及HF+Rosi组显著增加小鼠骨骼肌中GLUT4的蛋白质含量依前述组排序分别为P〈〇•01、P〈〇•01、P〈〇•001、P〈〇•05、P〈0•001。册组小鼠的p-Akt总Akt蛋白表现量低于CON组；但在HF+K1组、HF+K2组、HF+K3组、HF+Feno组及HF+Rosi组显著增加小鼠的肝脏组织及骨骼肌P_AMPK依前述组排序，肝脏组织分别为P〈0.001、P〈0.001、P〈0•001、P〈0•01、P〈0•001，骨骼肌分别为P〈0•001、P〈0•001、P〈0•001、P〈0•001、P〈0•001。[0070]综上所述，本发明开发了牛樟芝萃取物的活性物质EK100作为对于糖尿病及血脂异常的治疗效果。高脂喂养小鼠在口服活性物质EK100后，血糖、糖化血色素HbAlc、总胆固醇TC、三酸甘油酯TG、胰岛素及瘦体素的血液浓度都有明显下降且最终改善胰岛素阻抗。EK100具有降低小鼠的肝脏空泡样变以及内脏脂肪细胞尺寸的功效。小鼠经施予EK100后，骨胳肌中的GLUT4及p-Akt显著地增加。EK100具有使小鼠骨胳肌及肝脏中的p-AMPK显著增加。EK100能够降低肝脏的PEPCK及G6-Pase表现量并降低肝脏葡萄糖的生成。EK100通过减弱SREBP-lc但增加PPARa的表现，达到抑制肝脏脂肪酸合成及增加脂肪酸氧化，进而降低肝脏血液中三酸甘油酯的功效。EK100具有使肝脏的SREBP-2的表现量下降，达到降低血液中胆固醇水平的功效。EK100透过增加ap〇A-I在肝细胞的表现量而能够提高HDL-C的浓度。EK100具有调节GLUT4、PEPCK、G6-Pase、SREBP-lc、SREBP-2、apoA-I&p-AMPK的功效，而具有治疗第^型糖尿病及与其相关的尚血脂症的潜力。

权利要求：1.一种牛樟芝萃取物，其是自牛樟芝深层发酵液的冻干粉提取的活性物质，其特征在于，该活性物质具有一R基，该R基选自H、，其中，当R基为Η时，萃取物为活性物质ΕΚ100，萃取物为活性物质ΕΚ100的衍生物。2.如权利要求1所述的牛樟芝萃取物，其特征在于，该活性物质ΕΚ100是将牛樟芝深层发酵液的冻干粉以甲醇在室温下萃取三次;令该甲醇萃取液在真空中蒸发，得到棕色残留物;将该棕色残留物悬浮于纯水中，利用乙酸乙酯将其分离出一混合物;将该混合物在硅胶上进行层析，利用己烷与乙酸乙酯的混合物洗提以增加极性，再以高效液相色谱法纯化后制得一产物，将该产物经含有10%乙酸乙酯的己烷溶液洗提，并用乙醇进行重结晶后所制得。3.-种如权利要求1或2所述的牛樟芝萃取物的用途，其特征在于，其是用于制备降低血糖、影响血液胰岛素、糖化血红素及治疗糖尿病的医药化合物。4.一种如权利要求1或2所述的牛樟芝萃取物的用途，其特征在于，其是用于制备降低血脂中包括总胆固醇或三酸甘油酯的医药化合物。5.-种如权利要求1或2所述的牛樟芝萃取物的用途，其特征在于，其是用于制备增加血液中的高密度脂蛋白的医药化合物。6.-种如权利要求1或2所述的牛樟芝萃取物的用途，其特征在于，其是用于制备活化骨骼肌与肝脏的腺苷单磷酸活化蛋白激酶、以及葡萄糖转运蛋白4的医药化合物。7.-种如权利要求1或2所述的牛樟芝萃取物的用途，其特征在于，其是用于制备增加骨骼肌蛋白质激酶Β的磷酸化，并提升胰岛性敏感性的医药化合物。8.-种如权利要求1或2所述的牛樟芝萃取物的用途，其特征在于，其是用于制备增加肝脏内的腺苷单磷酸活化蛋白激酶的医药化合物。9.一种如权利要求1或2所述的牛樟芝萃取物的用途，其特征在于，其是用于制备治疗由高脂肪饮食所引起的脂肪肝，以及降低肝脏的总脂质及三酸甘油酯的含量的医药化合物。10.-种如权利要求1或2所述的牛樟芝萃取物的用途，其特征在于，其是用于制备治疗由高脂肪饮食所引起的脂肪变性，以及降低肝脏空泡样变现象的医药化合物。11.一种如权利要求1或2所述的牛樟芝萃取物的用途，其特征在于，其是用于制备由高脂肪饮食所引起的脂肪肝，以及降低肝脏内的胆固醇调节组件结合蛋白lc和增加脂肪酸氧化酶基因显现量的医药化合物。12.-种如权利要求1或2所述的牛樟芝萃取物的用途，其特征在于，其是用于制备因高脂肪饮食所引起的高瘦体素血症，即降低血中瘦体素浓度的医药化合物。13.-种如权利要求1或2所述的牛樟芝萃取物的用途，其特征在于，其是用于制备由降低因高脂肪饮食所引起的高内脏脂肪重量，以及降低内脏脂肪细胞大小的医药化合物。

百度查询： 施纯青 可用于降低血糖、血脂及降肝脏脂肪的牛樟芝萃取物Ergostatrien-3β-ol医药组成物及其制备方法与用途