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摘要：本发明公开了一种iPSC途径的人肝脏类器官全阶段3D培养构建方法。本发明所公开的方案具体采用合适培养体系，同时基于全阶段3D培养，通过6个阶段的培养构建多谱系人肝脏类器官。本发明解决了现有技术中存在人肝脏类器官培养过程中出现的大小均匀度较低，经过传代后出现的成球能力减弱，类器官传代后存活率降低等问题。本发明提升了通过iPSC途径培养形成的人肝脏类器官传代后的类器官成球能力和存活率，以及类器官的可传代数。
主权项：1.一种iPSC途径的人肝脏类器官全阶段3D培养构建方法，其特征在于，方法包括：步骤1，将BME、AdvancedDMEMF12和复苏后的人胚胎干细胞混合构建3D培养骨架；之后向3D培养骨架中添加含ActivinA、rhBMP-4、B27和rock的基础培养液A进行培养，诱导类器官向内胚层分化；所述基础培养液A为含有ITS-Plus、A83-01、N21、N-Acetylcysteine和HEPES的RPMI1640培养基；步骤2，将步骤1培养体系中的培养液更换为含rhBMP-4、rhFGF-4和CHIR99021的基础培养液B继续培养，诱导类器官向前肠分化；所述基础培养液B为含有ITS-Plus、A83-01、N21、N-Acetylcysteine和HEPES的AdvancedDMEMF12培养基；步骤3，将步骤2培养体系中的培养液更换为含rhBMP-4和B27的基础培养液B继续培养，诱导向前肠分化；步骤4，将步骤3培养体系中的培养液更换为含rhHGF的基础培养液C继续培养，诱导类器官向成肝细胞分化；所述基础培养液C为含有ITS-Plus、A83-01、N21、N-Acetylcysteine和HEPES的HCM培养基；步骤5，将步骤4培养体系中的培养液更换为含rhHGF、Dexamethasone和rhOSM的基础培养液C继续培养，促进细胞分裂和生长；步骤6，将步骤5培养体系的培养液更换为含rhKGFFGF-7的基础培养液C继续培养，诱导类器官分化形成胆管细胞，生长为成熟的多谱系人肝脏类器官。
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百度查询： 西北农林科技大学 一种iPSC途径的人肝脏类器官全阶段3D培养构建方法
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