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申请/专利权人：雀巢产品技术援助有限公司

摘要：本发明涉及营养组合物，所述营养组合物用于促进或诱导与用常规营养组合物喂养的婴幼儿相比、与仅用人类母乳喂养的婴幼儿更接近的肠道微生物群。所述组合物具体地预期用于主要用婴儿配方食品喂养的介于0和12个月之间的婴幼儿。可在2个月、4个月或6个月期间喂养所述婴幼儿并且所述组合物可以是婴儿配方食品。所述组合物促进健康的肠内菌群并且具有有益的长期效果和短期效果。

主权项：用于婴儿或幼儿的营养组合物，其包含动物双歧杆菌乳酸亚种Bifidobacterium animalis ssp.lactis益生菌，其用于在介于0和36个月之间、任选介于0和12个月之间的婴儿或幼儿中促进或诱导与主要用不包含所述益生菌的常规营养组合物喂养的婴幼儿的微生物群相比、与仅用人类母乳喂养的婴幼儿的微生物群更接近的肠道微生物群。

全文数据：用于诱导与母乳喂养的婴幼儿的肠道微生物群接近的肠道微生物群的包含动物双歧杆菌乳酸亚种BifidobacteriumanimaIisssp.Iactis以及任选的低聚糖的混合物的营养组合物和婴儿配方食品技术领域[0001]本发明涉及用于婴儿和幼儿的营养组合物以及其在婴幼儿中的健康效应。具体地讲，其涉及包含特定益生菌的婴儿配方食品，该婴儿配方食品用于诱导与仅用人类母乳HBM喂养的婴幼儿的肠道微生物群接近的肠道微生物群。背景技术[0002]每当母亲不能母乳喂养其婴幼儿时，婴儿配方食品可为使用人类母乳的天然母乳喂养提供合适的替代方案。用于婴儿和幼儿的营养组合物通常作为用水重构的散剂或在某些情况下作为即饮型或浓缩液体组合物出售。这些组合物旨在覆盖婴儿或幼儿的大部分或所有营养需要。[0003]然而，已经知道人类母乳代表婴幼儿的营养方面终极的黄金标准。婴儿配方食品制造商已作出许多尝试来产生接近或类似于人类母乳的益处的营养健康影响。[0004]建议所有婴幼儿采用母亲的乳汁喂养。然而，在一些情况下，由于某些医学原因，母乳喂养并不足够或不成功，或者母亲不选择母乳喂养。已针对这些情况研发了婴儿配方食品。还研发了用特殊成分丰富母亲的乳汁或婴儿配方食品的强化剂fortifier。[0005]然而在许多实例中，研究表明，与人类母乳相比，婴儿配方食品不会对身体产生相同的影响。例如，喂予婴儿配方食品的婴幼儿和喂予人类母乳HBM的婴幼儿可表现出不同的肠道微生物群。[0006]生命的婴幼儿期，尤其是头几周、头3个月、头6个月或头12个月，对于建立平衡的肠道微生物群是至关重要的。[0007]已知婴幼儿期肠道微生物群的调节对于身体的未来健康状况可预期具有重大影响。例如肠道菌群可对以后生活中肥胖症的发展、对以后生活中强免疫系统的发育或正常的生长具有影响。[0008]类似地，健康的肠道微生物群是婴幼儿健康的指示，肠道微生物群的改变可能是异常健康事件诸如腹泻、营养物质吸收不足、绞痛、睡眠改变和生长发育改变的指示和或起因）。[0009]已知分娩方式可影响婴幼儿的初始肠道微生物群：与经阴道分娩的婴幼儿相比，经剖腹产分娩的婴幼儿具有不同的肠道微生物群。[0010]已知，除了其它成分之外，非消化性碳水化合物益生元尤其会影响特定微生物群的繁殖。例如，已证实某些低聚半乳糖GOS和或某些低聚果糖FOS可促进肠道尤其是婴幼儿肠道中的双歧杆菌的生长和繁衍。[0011]然而，在婴幼儿的发育过程中，肠道微生物群及其进化是许多肠道细菌种群的存在和繁衍数量之间的精密平衡。关于肠道细菌对婴幼儿总体健康的影响，一些肠道细菌被分类为“通常阳性”，而另一些为“通常阴性”（或致病性）。[0012]相比于母乳喂养的婴幼儿，某些种类的“通常阳性”细菌诸如双歧杆菌），在喂予常规婴儿配方食品的婴幼儿中可能不足。类似地，一些细菌种群被认为是致病性的，并且在肠道微生物群中应保持低繁衍。[0013]的确用婴儿配方食品喂养的婴幼儿可能不能获益于仅用或主要用人类母乳喂养的婴幼儿的天然、良好平衡的肠道菌群肠道微生物群）。母乳喂养的婴幼儿中所观察到的这种天然微生物群确实既随时间推移得到良好控制（随时间而演变又十分复杂。许多微生物类群共存于肠道肠内的高度复杂微环境中，每一者以依序限定的比例存在。当限定婴儿或幼儿的微生物群时，应该考虑数量维度和质量维度。此外，肠道微生物群随时间推移的变化增加了复杂性。[0014]虽然许多研究已确定了促进特定阳性细菌在婴幼儿肠道中的生长和繁衍的方法，但对于诱导与母乳喂养的婴幼儿的微生物群相似的微生物群的方法知之甚少。[0015]对于用婴儿配方食品的方法喂养的婴幼儿，存在促进和或诱导与母乳喂养的婴幼儿的微生物群接近的总体微生物群的需要。[0016]对于用婴儿配方食品喂养的婴幼儿，存在随时间推移促进和或诱导微生物群的需要，该群落的演变方式与母乳喂养的婴幼儿的微生物群相似。[0017]对于用婴儿配方食品喂养的婴幼儿，还存在给他们提供最好的营养的需要，这种最好营养使得能在该营养干预期间短期和或在该营养干预后长期发展出与母乳喂养的婴幼儿的微生物群接近的微生物群。[0018]对于用婴儿配方食品喂养的婴幼儿，存在通过营养诱导和或促进与母乳喂养的婴幼儿的微生物群接近类似的微生物群的发展，来诱导最佳的短期或长期健康状态的需要;这种健康状态包括随时间推移的最佳生长，和免疫系统的最佳发育，以及代谢障碍的预防。[0019]存在补偿非母乳喂养的婴幼儿中观察到的低常微生物群的需要。存在使这种微生物群再平衡的需要。[0020]对于用婴儿配方食品喂养的婴幼儿，存在诱导和或促进特定的细菌科、属或种或株在他们肠内发展，例如用以获得与母乳喂养的婴幼儿的微生物群接近的微生物群的需要。[0021]对于用婴儿配方食品喂养的婴幼儿，存在抑制和或下调特定的细菌科、属或种或株在他们肠内发展，例如用以获得与母乳喂养的婴幼儿的微生物群接近的微生物群的需要。[0022]需要下调婴幼儿的肠道中致病性细菌或“阴性细菌”的发育和生长。[0023]需要选择性地影响或减少婴儿和幼儿的肠道中致病性细菌的生长，同时促进或至少不会影响阳性肠道细菌的生长。[0024]在建立这种平衡时，需要在生命的头几周期间增强婴幼儿的总体肠道微生物群的良好平衡，尤其是通过下调或抑制致病性细菌的生长。[0025]需要通过耐受性良好的“软冲击”（指没有或有很少的副作用）来增强这种良好平衡。发明内容[0026]本发明涉及用于婴儿和幼儿的营养组合物，诸如婴儿配方食品或较大婴儿配方食品，优选婴儿配方食品。该组合物包含动物双歧杆菌乳酸亚种^Bifidobacteriumanimalisssp.lactis益生菌。与主要用不包含动物双歧杆菌乳酸亚种（Bifidobacteriumanimalisssp.lactis的常规婴儿配方食品喂养的婴幼儿相比，该益生菌促进或诱导与仅用人类母乳喂养的婴幼儿所谓的纯母乳喂养婴幼儿的肠道微生物群更接近的肠道微生物群。所述婴儿或幼儿可介于〇和36个月之间，优选介于0和12个月之间。附图说明[0027]图1:示出了配方食品喂养组V=对照配方食品；0=B.Iactis配方食品）与母乳喂养组之间的平均加权Unifrac距离。该距离越接近零，则与母乳喂养组越接近。[0028]图2:示出了配方食品喂养组T和配方食品喂养组C与母乳喂养组B之间的平均加权Unifrac距离。组T:有B.Iactis益生菌;组C:无B.Iactis益生菌的对照。该距离越接近零，贝Ij与母乳喂养组B越接近。[0029]图3:三个喂养组在三个时间点的α多样性分析的箱线图。P值：*，0.4。在喂养试验期间，来自T组而不是来自C组的婴幼儿显示出与B组婴幼儿相当的黄色粪便对绿色粪便的比例（图5。颜色相似是具有类似接近的微生物群的指示。[0222]粪便微生物学分析:定量实时PCR。当按照指派的喂予方案时在第一次产品施用之前以及在6周大和12周大时从婴幼儿收集粪便样品。在按方案分析中，可获得每个组和时间点的来自18至23名婴幼儿的粪便。对每个时间点收集粪便样品，在排便后于4°C下冷藏最多10小时，并于_80°C下冷冻保存直至进行微生物群分析。使用QIAampDNAStoolMiniKitQIAGEN，按照制造商的说明提取总DNA，不同的是使用FastPrep装置和LysingMatrixB管MPBiochemicals公司）增加一系列的机械破碎步骤11X45s。我们使用容许分类分化的16SrRNA基因引物。在招募时大与6周大之间所有三个组中双歧杆菌的总计数增加，此后其保持恒定直至12周（图4A。与C组中的婴幼儿相比，T组中的婴幼儿显示出更明显的双歧杆菌属滴度的增加，增加0.81og。在T组中，双歧杆菌的最终粪便滴度为0.8X101个细菌g粪便，显著高于C组中和B组中的滴度。相比于T组，来自C组的婴幼儿中拟杆菌属Bacteroides和乳杆菌分别显示出高10倍和低10倍的粪便数目（数据未显示，以及图4B。[0223]为了在双歧杆菌属中实现进一步解析，我们使用了一套基于groEL基因的qPCR引物，其允许检测12种双歧杆菌属物种两岐双岐杆菌B.bifidum和长双歧杆菌（图4C和图4D〇[0224]微生物群组成:多样性指数。通过16SrRNA基因焦磷酸测序来补充微生物群分析。在Roche454GS-FLX-Titanium测序仪上PCR扩增16S可变区Vl至V3并测序。用Mothurv.1.33.0软件包（Schloss，P.D.，S.L.Westcott，T.Ryabin，J·R·HalI，M·Hartmann，E.B.Hollister?R.A.Lesniewski?B.B.Oakley?D.H.Parks?C.J.Robinson?J.ff.Sahl?B.Stres?G.G.Thallinger?D.J.VanHornandC.F.Weber2009〇''Introducingmothur：Open-source,platform-independent?community-supportedsoftwarefordescribingandcomparingmicrobialcommunities〇’，AppliedandEnvironmentalMicrobiology7523:7537-7541·和QHMEV.1.8软件包（Caporaso，J.G.，Kuczynski，J.，Stombaugh，J.，Bittinger，K.，Bushman，F.D.，Costello，E.K.etal.2010bQIIMEallowsanalysisofhigh-throughputcommunitysequencingdata.NatMethods7:335-336分析原始序列数据。以97%同一"性进行OTU从头挑选denovopicling并在Greengenes参考数据库V.13.8上用RDP分类器进行OTU代表性序列的分类指派（taxonomyassignment。使用PyNast在Greengenes核心参考比对数据集上将相同的序列进行比对。然后过滤所得的多重比对并用于利用FastTree构建系统树。在质量过滤后，将所有样品之间的系统发育距离计算为UniFrac距离。在分析并排除具有不完整数据集的受试者后，我们获得了来自每组至少13名婴幼儿的所有三个时间点的粪便微生物群组成。图3比较了基线时以及喂予6周和12周后三个组的α-多样性（用Calypso计算，http:bioinfo·qimr.edu.aucalypso。在基线时，三个喂养组在微生物多样性香农指数Shannonindex方面差异不显著。在6周大时，当与T组和B组中的婴幼儿相比时，C组中的婴幼儿由于丰富度和均匀度二者的增加，显示出更高的多样性指数。在12周大时，C组而不是T组在多样性和丰富度方面不同于B组。使用QIIME计算样品之间的加权Unifrac距离（其考虑OTU之间的系统发育距离）。然后，在每组中，分析每种样品与母乳喂养组的样品相比的距离分布。由Mann-WhitneyU测试给出统计显著性（图2。用具有B.Iactis和BMOS的配方食品喂养的婴幼儿⑺的总体微生物群组成不同于用对照配方食品喂养的组⑹，并且在系统发育上与母乳喂养的组⑻更紧密相关。[0225]实施例4:另外的临床研究[0226]营养干预;随机双盲对照试验。[0227]在南非进行的多中心随机对照双盲试验测试了补充有益生元即从乳清渗透物产生的牛乳衍生低聚糖BMOS的混合物含有低聚半乳糖和乳低聚糖诸如和唾液乳糖）和益生菌即动物双歧杆菌乳酸亚种（Bifidobacteriumanimalisssp.IactisB.lactis菌株CNCM1-3446的配方食品对经阴道分娩的婴幼儿或经剖腹产的婴幼儿在早期生命中肠道内的双歧杆菌水平的影响。另外还评价了新配方的安全性。试验中所用的“BM0S”是如本发明中所定义的。[0228]将总共430名健康、足月、由HIV阳性母亲生产的婴幼儿随机分配进具有4个平行组的该多中心试验中，这些婴幼儿的母亲被选择成仅用配方食品从出生《3天大开始喂养她们的小孩。将总共421名已摄入任何研究配方食品的婴幼儿包括在全分析集（fullanalysisset，FAS中。[0229]第一两组由指派给测试配方食品（1段婴儿配方食品，其含有总低聚糖为5.8土I.OglOOg粉末配方食品（在重构的配方食品中为8gL的BM0S+B.IactisIX107cfug的剖腹产婴幼儿n=92或指派给对照婴儿配方食品的剖腹产婴幼儿η=101组成，第二两组由随机分配给相同测试配方食品的经阴道分娩的婴幼儿η=115或随机分配给对照配方食品的经阴道分娩的婴幼儿η=113，从招募开始到第6个月。[0230]主要的功效结果为第10天时的奠便双歧杆菌计数，主要的安全性结果为介于第10天和第4个月之间的每日增重g天）。[0231]在第10天时，在剖腹产婴幼儿中测试配方食品组中比对照配方食品组中粪便双歧杆菌计数显著更高（中值[范围]log:9·41[6·30-10·94]CFUg对6·30[6·30-10·51]CFUg，WiIcoxon检验，p=0.002，但在经阴道分娩的婴幼儿中并不如此（中值[范围]log:10.06[5.93-10.77]CFUg对9.85[6.15-10.79]CFUg，p=0.126。在经阴道分娩的婴幼儿和经剖腹产的婴幼儿二者中，测试配方食品组与对照配方食品组之间的平均每日增重差异的双侧95%置信区间的下限均高于-3g天，从而表明测试配方食品喂养的婴幼儿中的生长不次于对照配方食品喂养的婴幼儿。[0232]在第10天和第4周，用测试配方食品喂养的婴幼儿的粪便pH显著低于用对照配方食品喂养的婴幼儿中的pH，而不管分娩方式如何:对于阴道分娩:4.93对5.59p0.001第10天）以及5.01对5·71ρ0·001第4周），对于剖腹产:5.14对5·65ρ=0·009第10天），5.06对5.75p0.001第4周）。在第3个月时，这种酸化效果仅在剖腹产婴幼儿中持续。补充有益生元BMOS和益生菌Β.Iactis的婴儿配方食品在两种分娩方式中均诱导强的促双歧杆菌生长效果bifidogeniceffect，但从出生开始校正剖腹产婴幼儿中存在的低双歧杆菌水平更加明显。补充了的婴儿配方食品降低了粪便PH并改善了正常分娩的婴幼儿和剖腹产婴幼儿二者中的粪便微生物群。[0233]详细结果：（还可参见图6[0234]在FAS种群中，剖腹产婴幼儿（图6中的正方形）中与对照组相比，测试配方食品组中第28天和第3个月（第84天）的双歧杆菌计数也显著更高。然后，在第28天，测试配方食品组和对照配方食品组中，中值[范围]log双歧杆菌计数分别为10.15[6.30-10.96]cfug和9.00[6.30-10.77]cfug非参数WiIcoxon检验，p=0.001。在第84天，测试配方食品组和对照配方食品组中，中值[范围]log双歧杆菌计数分别为10.40[6.50-10.79]cfug和9.67[6·30-10·50]cfug非参数Wilcoxon检验，p0·001。[0235]在经阴道分娩的婴幼儿（图6中的三角形）中，与对照配方食品组相比，在第28天和第84天，测试配方食品组也具有显著增加的双歧杆菌计数。在第28天，测试配方食品组和对照配方食品组中，中值[范围]log双歧杆菌计数分别为10.25[6.75-10.98]cfug和9.66[6.30-10.31]cfug非参数Wilcoxon检验，p0.001。在第84天，测试配方食品组和对照配方食品组中，中值[范围]log双歧杆菌计数分别为10.45[8.22-10.96]cfug和9.95[6·30-10·17]cfug非参数Wilcoxon检验，p0·001。[0236]在采用任一分娩方式的婴幼儿中，第3天和第10天的总细菌计数在测试配方食品组和对照配方食品组之间没有显著不同（数据未示出）。然而在第4周，在两种分娩组中总细胞计数在测试配方食品组中均较高，在第3个月，仅在经阴道分娩的婴幼儿中总细胞计数在测试配方组中较高数据未示出）。[0237]最多至第4周，与对照配方食品组相比，测试配方食品组中更高比例的婴幼儿具有可检测的双歧杆菌属物种数据未示出）。与对照相比，在测试配方食品组中，乳杆菌属物种分别在经剖腹产的婴幼儿和经阴道分娩的婴幼儿中在第4周和第3个月在更高比例的婴幼儿中可检测。在第10天、第4周和第3个月，与对照配方食品组中的那些相比，测试配方食品组中在显著更高比例的婴幼儿中检测到B.Iactis数据未示出）。与测试配方食品组相比，对照配方食品组中在显著更高比例的婴幼儿中检测到大肠杆菌和葡萄球菌属Staphylococcus、肠杆菌属Enterobacteria和克雷伯氏杆菌属Klebsiella物种数据未显示）。

权利要求：1.用于婴儿或幼儿的营养组合物，其包含动物双歧杆菌乳酸亚种（Bifidobacteriumanimalisssp.Iactis益生菌，其用于在介于0和36个月之间、任选介于0和12个月之间的婴儿或幼儿中促进或诱导与主要用不包含所述益生菌的常规营养组合物喂养的婴幼儿的微生物群相比、与仅用人类母乳喂养的婴幼儿的微生物群更接近的肠道微生物群。2.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于所述组合物包含至少一种N-乙酰化低聚糖和或至少一种低聚半乳糖和或至少一种唾液酸化低聚糖，任选为如下量：-介于0.001重量％至1重量％之间、优选介于0.003重量％和0.3重量％之间的N-乙酰化低聚糖-介于1重量％和10重量％之间、优选介于3重量％和6重量％之间的低聚半乳糖-介于0.005重量％和1重量％之间、优选介于0.01重量％和0.4重量％之间的唾液酸化低聚糖全部以所述组合物的重量％计算。3.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于所述婴幼儿天生具有脆弱的或不平衡的微生物群或微生物群失调，诸如早产的婴幼儿、小于胎龄出生的婴幼儿、经剖腹产出生的婴幼儿、住院的婴幼儿或用抗生素治疗或已用抗生素治疗的婴幼儿。4.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于所述婴幼儿为0至6个月大。5.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于所述组合物包含低聚果糖，优选地所述至少90%、99%或100%的所述低聚果糖具有介于2和8之间的聚合度。6.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于所述组合物包含脂肪，并且所述脂肪的至少8%、优选至少9.6%为sn2棕榈酸酯。7.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于所述组合物包含在sn2位具有超过33%的棕榈酸的甘油三酯。8.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于所述组合物为婴儿配方食品或较大婴儿配方食品。9.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于所述组合物包含至少0.3gIOOkcal或2.3gL组合物的量的α-乳白蛋白蛋白质。10.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于所述促进或诱导与仅用人类母乳喂养的婴幼儿更接近的肠道微生物群进一步表征为包括上调动物双歧杆菌B.animalis和或双歧杆菌属Bifidobacterium和或长双歧杆菌B.Longum和或乳杆菌属Lactobacillus的种群，以及或者下调奠芽孢菌属Coprobacillus和或链球菌属（Streptococcus的种群。11.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于所述“促进或诱导与仅用人类母乳喂养的婴幼儿的微生物群更接近的肠道微生物群”进一步表征为促进或诱导与母乳喂养的婴幼儿的微生物群的系统发育距离小于0.3个单位通过Unifrac方法测量）、优选小于0.25个单位的肠道微生物群。12.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于所述促进和或诱导与仅用人类母乳喂养的婴幼儿更接近的肠道微生物群可在婴幼儿粪便中测量，任选可在1、4、6或8周大时或在1、4、6或8周大之后测量，并且任选可在用所述营养组合物喂养1、4、6或8周之后测量。13.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于所述组合物在生命的头1、2、4、8或12周期间喂予或预期喂予。14.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于所述促进和或诱导与仅用人类母乳喂养的婴幼儿更接近的肠道微生物群进一步表征为促进和或诱导健康的生长、健康的免疫系统和或健康的肠道功能，尤其是在以后的生活中。15.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于所述益生菌动物双歧杆菌乳酸亚种（Bifidobacteriumanimalisssp.Iactis为CNCMI-3446〇16.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于所述益生菌以介于105cfug组合物和l〇12cfug组合物之间、优选介于106cfug组合物和108cfug组合物之间的量存在于所述组合物中。

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