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申请/专利权人：程张军;南京诺唯赞医疗科技有限公司

摘要：本发明公开一种肝癌诊断标志物BRIX1及其应用，本发明提供所述标志物BRIX1在制备用于诊断或辅助诊断肝癌产品中的应用，结合现代分子生物学和生物信息学等知识和手段，对RNA结合蛋白BRIX1进行更深入的分子改良，筛选性能优良的突变体BRIX1‑1，低成本地制备优质高效的新型BRIX1抗体，并建立方法学检测血液中的BRIX1，具有非常重要的理论价值和现实意义。

主权项：1.标志物BRIX1-1在制备用于诊断或辅助诊断肝癌产品中的应用。

全文数据：一种肝癌诊断标志物BRIX1及其应用技术领域本发明属于基因工程和蛋白工程领域，具体是一种肝癌诊断标志物BRIX1及其应用。技术背景肝癌是世界范围内的恶性肿瘤之一，死亡率极高，亚洲属于肝癌的高发地区。中国是肝癌大国，肝癌患者已占全球的50％左右，其中新增癌症病例与肝癌的死亡人数均高居世界第一位。在我国，肝癌仅次于肺癌，是死亡率第二高的癌症疾病。肝癌大致可以分为原发性肝癌和转移性肝癌。在肝癌患者中，多数是感染了乙肝病毒或者丙肝病毒并逐渐由急性病毒感染转变为慢性病毒肝炎而最终进展为肝癌。据统计，乙肝患者发生肝癌的风险比正常人高出100～150倍，我国慢性乙肝患者人数已超过2000万人，肝癌患者不断增多。除此以外，摄入被黄曲霉毒素污染的食物、过量饮酒也都是诱发肝癌的重要因素。针对肝癌的筛查和诊断工作已经刻不容缓。目前，肝癌的主要治疗方法还是以放疗、化疗以及手术切除为主，肝癌早期进行切除手术存活率较高，但在IV期时则不超过38％。也就是说肝癌发现的越早，对其治疗状况以及术后预后都有极大的改善。CTMRI是用于肝癌检测最为直观的方法，但是不适用于高危患者。甲胎蛋白AFP是用于早期肝癌检测的已知生物标志物，一般在含量不断上升时有确定的意义，但是特异性和早期检出率较差。AFP与肝癌以及多种肿瘤的发生均表现出较高的浓度，在某些肝炎患者、肝硬化患者等的体内也会出现AFP升高的情况，检测过程中有假阳性的存在。在18％-20％的原发性肝癌患者中血清AFP正常，因此AFP阴性也不能用于排除原发性肝癌。发现并应用具有高特异性和高敏感度的肝癌早期诊断与预后评估标志物将有效改善肝癌现状。发明内容本发明目的之一在于提供一种新的肝癌诊断标志物BRIX1及其在肝癌诊断中的应用。本发明目的之二在于提供一种新的抗原BRIX1-1。本发明目的之三在于提供一种用于诊断标志物BRIX1的抗体。本发明的目的通过以下技术方案具体实现：本发明提供一种新的肝癌诊断标志物BRIX1，其核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，氨基酸序列如SEQIDNO.4所示，申请人发现BRIX1在肝癌组织中高表达，显著高于癌旁组织。患者术后总生存率和复发率结果显示BRIX1高表达者预后差。在BRIX1对肝癌细胞生物学行为的分析中发现BRIX1蛋白与肝癌细胞的凋亡显著相关，敲除BRIX1使肝癌细胞体内成瘤能力下降；BRIX1的表达基因主要与癌症、器官损伤和消化道疾病有关，提示BRIX1蛋白在肝癌的进展中发挥重要作用，可利用BRIX1蛋白的特异性单克隆抗体进行免疫组化诊断。本发明还提供扩增所述标志物BRIX1的引物：引物P1:引物P2:本发明还提供所述标志物BRIX1在制备用于诊断或辅助诊断肝癌产品中的应用。本发明所述的标志物BRIX1存在于肝癌患者的血液中，即BRIX1可以用作诊断肝癌的血清学标志物。在一种具体的实施方式中，本发明提供一种基于ELISA方法建立的BRIX1测量系统以检测血液中的BRIX1。本发明还提供一种提高标志物BRIX1的突变体BRIX1-1，序列如SEQIDNO.1所示，或者与SEQIDNO.1具有98％同一性的序列，优选的，如SEQIDNO.1所示或者与SEQIDNO.1具有99％同一性的序列。本发明还提供一种能够编码突变体BRIX1-1的核苷酸序列，如SEQIDNO.2所示。本发明是通过核苷酸定点突变将BRIX1第66位的丝氨酸编码序列TCT突变为天冬氨酸编码序列GAC，利用原核表达载体通过基因工程技术获得的突变体蛋白，命名为BRIX1-1。这种突变体具有天然BRIX1的生物活性和强的生物稳定性，且在原核体系中表达水平高，可以在室温条件下长时间保持结构和功能的稳定，便于保存、运输，在生物药业和生物制剂方面具有非常广泛的应用前景。本发明还提供所述突变体BRIX1-1在在生物药业和生物制剂方面的应用，特别是用于诱导制备特异性识别标志物BRIX1的抗体中的应用。本发明所述的突变体BRIX1-1诱导制备特异性识别标志物BRIX1的抗体，抗体来源、类型单克隆、多克隆和形态不限。具体的抗体来源包括但不限于小鼠抗体、人抗体、嵌合抗体。抗体类型优选单克隆抗体。所述的抗体制备方法可利用众所周知的单克隆或者多克隆抗体制备方法。优选单克隆制备方法。更优选的，使用哺乳动物细胞制备单克隆抗体的方法。哺乳动物细胞制备的单克隆抗体包括但不限于通过杂交瘤细胞制备以及通过遗传工程方法用含有抗体基因的表达载体转化宿主制备的方法。本发明还提供了一株分泌特异性识别标志物BRIX1的抗体的杂交瘤细胞株，分类命名为杂交瘤细胞株BRI，于2019年4月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山，保藏编号CCTCCNO:C201969。本发明还提供所述杂交瘤细胞株分泌的抗体mAb-BRIX1。本发明还提供一种组合物，包括本发明所述的抗体mAb-BRIX1，和药学上常用的辅料。本发明还提供所述的抗体mAb-BRIX1在制备肝癌诊断或辅助诊断试剂中的应用。本发明还提供包含所述抗体mAb-BRIX1的试剂盒。本发明还提供所述抗体mAb-BRIX1在用于制备治疗肝癌药物或用于研究肝癌的生物制剂中的应用。本发明所述的抗体mAb-BRIX1可在基于ELISA方法建立的BRIX1测量系统中用以检测血液中的BRIX1。本发明的有益效果：针对我国肝癌诊疗的现状，开发具有自主知识产权新型早期诊断标志物，本研究结合现代分子生物学和生物信息学等知识和手段，对RNA结合蛋白BRIX1进行更深入的分子改良，筛选性能优良的突变体，低成本地制备优质高效的新型BRIX1抗体，并建立方法学检测血液中的BRIX1，具有非常重要的理论价值和现实意义。附图说明图1为本发明实施例2中重组质粒His-BRIX1-1-pET28a构建图谱；图2为本发明实施例2中通过定点突变的BRIX1-1突变体蛋白PCR扩增：M：DNAmarker；1：BRIX1原始片段；2：BRIX1突变片段；图3为本发明实施例3中原核表达BRIX1-1突变体蛋白SDS-PAGE电泳鉴定结果图：M：Proteinmarker；1：诱导前His-BRIX1-1-pET28a-BL21全菌；2：诱导后His-BRIX1-1-pET28a-BL21全菌；3：诱导后His-BRIX1-1-pET28a-BL21上清；4：诱导后His-BRIX1-1-pET28a-BL21沉淀；图4为本发明实施例3中突变体蛋白BRIX1-1纯化图：M：Proteinmarker；1：BRIX1-1纯化前原液；2：BRIX1-1过Ni穿透液；3：BRIX1-1在200mmolL咪唑条件下洗脱液；4：BRIX1-1在500mmolL咪唑条件下洗脱液；图5为本发明实施例4中单克隆抗体BRIX1-1SDS-PAGE纯化电泳鉴定结果图：M：Proteinmarker；1：纯化前腹水还原剂处理的样品；2：纯化后单克隆抗体还原剂处理的样品；3：纯化前腹水未加还原剂；4：纯化后单克隆抗体未加还原剂；图6为本发明实施例5中肝癌及非肝癌血液样本中的BRIX1蛋白含量。具体实施方式为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。申请人发现BRIX1在肝癌组织中高表达，显著高于癌旁组织。患者术后总生存率和复发率结果显示BRIX1高表达者预后差。在BRIX1对肝癌细胞生物学行为的分析中发现BRIX1蛋白与肝癌细胞的凋亡显著相关，敲除BRIX1使肝癌细胞体内成瘤能力下降；BRIX1的表达基因主要与癌症、器官损伤和消化道疾病有关，提示BRIX1蛋白在肝癌的进展中发挥重要作用，可利用BRIX1蛋白的特异性单克隆抗体进行免疫组化诊断。实施例1突变体BRIX1-1的构建1同源建模蛋白质的空间结构是决定其功能的基础，同源建模法Homologymodel是目前唯一能够从蛋白质的氨基酸序列出发，建立其3D模型的计算方法，是当前对未知蛋白质空间结构进行理论预测的主要方法之一。如果两种蛋白质的序列一致性Identity超过30％，它们很有可能以相同的折叠方式形成它们相似的空间结构，如果一对蛋白质的序列一致性大于60％，同源建模的结果将接近实验测试的结果即它们空间结构几乎相似。由于到目前为止，天然BRIX1的晶体结构还没有得到解析，所以本发明立足于建立该蛋白计算机理论模型，对目的蛋白进行结构分析和功能预测，并以此为依据对目的蛋白进行适当的改造，期望得到性能有改良的突变体。2基于结构的序列比对、截断位点和突变位点的确定通过Pymol或Swiss-PDBViewer生物软件，预测BRIX1的底物结合口袋、底物结合位点、功能保守区域、稳定结构和催化活性相关的氨基酸残基，确定突变第66位氨基酸丝氨酸为天冬氨酸，这样将得到稳定性和表达量有所提高的突变体BRIX1-1，其序列如SEQIDNO.1所示，编码的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。实施例2：His-BRIX1-1-pET28a-BL21原核体系构建根据已报道的人BRIX1基因序列和BRIX1-1突变体突变位点核苷酸，设计特异性引物，并在连接引物的两端引入约15bp的同源臂，其中在设计反向引物中将原终止密码子TAG改为大肠杆菌偏性的TAA。核酸定点突变原则设计一对重叠PCR引物使BRIX1第66位的丝氨酸突变为天冬氨酸。引物P1:引物P2:其中加粗为同源臂序列。定点突变overlapPCR引物：P3:5’-CGGATTCTCATCTTTGACTCCAGAGGAATAAATTT-3’；P4:5’-ATTTATTCCTCTGGAGTCAAAGATGAGAATCCGTT-3’。成功从人293cDNA文库中调出BRIX1片段，利用人293cDNA文库为模板，引物P1和P2通过PCR扩增得到BRIX1片段；以引物P1与P4、P2与P3、P1与P2通过overlapPCR方法扩增得到突变体BRIX1-1片段图2，其大小符合理论值。将纯化后的PCR产物与线性化pET28a载体同源重组，构建重组质粒His-BRIX1-1-pET28a图1。实施例3：重组BRIX1-1蛋白的表达和纯化将测序正确的阳性克隆菌落接种喊卡那霉素的LB培养基中，37℃，200rpm培养，当菌液OD600达0.8时，加入1:1000IPTG诱导4h，离心收集菌体，按1:10将菌体溶于1×PBS缓冲液中，常规超声破碎，离心分别收集上清和沉淀，SDS-PAGE电泳分析目的蛋白的表达量和表达形式。4℃条件下将目的蛋白粗提掖过Ni离子交换柱，并用咪唑进行梯度洗脱，SDS-PAGE电泳分析。如图3所示，SDS-PAGE电泳检测发现，目的蛋白能在原核体系中表达，且以包涵体形式存在，表达量较原先研究数据提高了约3倍。将表达的目的蛋白过Ni纯化，经SDS-PAGE分析图4，目的蛋白在500mmolL咪唑中被大量洗脱，纯度大于90％。将纯化的重组BRIX1-1用储存液稀释至100mgL后等量分装，置于4℃保存，于0、5、10、15天各取出一份，通过SDS-PAGE分析粗略判断蛋白的稳定性均未发现明显降解，说明其稳定性高。实施例4：BRIX1-1抗体的制备与纯化将浓度为1mgml的纯化的重组BRIX1-1蛋白与等量的弗氏完全佐剂用双注射器互推法混合乳化，用乳化好的抗原免疫6-8周无特定病原体级雌性BALBc小鼠，每只小鼠从跗关节处注射40μg抗原。2天后，将浓度为1mgml的纯化的重组BRIX1-1蛋白与等量的弗氏不完全佐剂用双注射器互推法混合乳化，对每只小鼠再次从跗关节处注射40μg乳化的抗原。8天后，尾静脉采血，离心取上清，用间接ELISA法检测血清效价。选取血清效价大于106的小鼠，颈椎脱臼处死后取淋巴细胞进行细胞融合。以PEG1500作为融合剂，融合sp20骨髓瘤细胞和免疫小鼠的淋巴细胞，两种细胞比例为1:2-1:3。融合细胞置于含20％FBS血清的HAT-1640培养基培养。一周后观察融合状态并换液，换液3天后取细胞培养上清。用天然BRIX1蛋白包被ELISA板，用间接ELISA方法筛选阳性克隆，选择阳性值与细胞数比值较高的细胞进行多次亚克隆，最终得到多株能够稳定分泌抗BRIX1蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞库。该杂交瘤细胞库分泌的单克隆抗体与血液中天然BRIX1蛋白有很高的亲和力。用含20％FBS血清的HAT-1640培养基培养上述杂交瘤细胞库中的细胞，3天后取细胞培养液，用间接ELISA方法分别测定细胞培养液中的单克隆抗体与纯化的重组BRIX1-1蛋白和天然BRIX1蛋白的相对亲和力。选取与纯化的重组BRIX1-1蛋白和天然BRIX1蛋白亲和力相同，且亲和力最高的单克隆细胞，最终得到一株高亲和力、高特异性的抗BRIX1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为BRI，于2019年4月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山，保藏编号CCTCCNO:C201969。在成年BALBc小鼠腹腔注射0.5ml无菌石蜡油，一周后再向腹腔内注入0.5ml的BRI杂交瘤细胞，细胞密度为1×106-2×106ml。两周后开始采集腹水。在腹水中缓慢加入等体积饱和硫酸铵，冰上搅拌30分钟后在4℃下12000g离心10分钟，沉淀用少量PBS溶解后用20倍体积的BindingbufferProteinASefinoseKit中提供透析，用ProteinA亲和柱纯化抗体后用SDS-PAGE电泳鉴定纯化效果。如图5所示，ProteinA亲和柱纯化抗体后用SDS-PAGE电泳鉴定纯化效果，经电泳分析，纯化后的抗体在还原的胶上呈现分子量为50kDa和25kDa的重链和轻链，而在非还原胶上呈现分子量约为150kDa的单一条带。这说明经亲和柱层析后单克隆抗体达到了相当高的纯度，可以用于进一步的研究。实施例5：利用抗BRIX1单抗进行肝癌患者血液样品的免疫分析12％SDS-PAGE分别分析肝癌样本、肝硬化样本及健康人血液样本。电泳完成之后，用电转法将凝胶中的蛋白质转移至硝酸纤维素膜上，把硝酸纤维素膜浸入5％脱脂奶粉，室温摇动2小时。用TBST洗膜之后，用5μgmL的BRI抗体封闭，4℃振摇过夜。用TBST洗膜之后，用辣根过氧化物酶HRP标记的山羊抗鼠IgG抗体1：4000，室温下振摇60分钟。用TBST洗膜之后，用化学发光试剂曝光。结果如图6所示，在肝癌样本中显著表达，而在肝硬化样本中表达量非常低，说明该抗体能特异性识别肝癌样本。实施例6：通过ELISA建立BRIX1测量系统以及检测血液中的BRIX11预包被抗原酶标板的制备用碳酸钠包被稀释液稀释BRI单抗并加至96孔板。弃去96孔板中液体，用PBS洗涤3次，甩干；每个孔中加入200μl封闭液，封闭液为3％BSA溶液，封膜置于37℃隔水式恒温培养箱，2小时；弃去96孔板中液体，用PBS洗涤3次，甩干，封膜后2-8℃保存，待用。2其他相关试剂准备1酶标抗原：利用碳二亚胺法用HRP酶标记BRIX1重组蛋白；2洗涤液：含0.1％Tween-20的1×PBS，pH7.5；3显色剂TMBA、B液：底物显色剂A为过氧化脲，底物显色剂B为四甲基联苯胺；4终止液：2MH2SO4溶液；3BRIX1蛋白检测试剂盒检测样本的方法1加样：将待测样本与酶标抗原混合，向预包被好的微孔板中加入待测样品50μl；2孵育：用封板膜封盖反应板，置于37℃隔水式恒温培养箱，孵育1小时；3洗板：撕去封板膜，弃去微孔中的液体，加满洗涤液，浸泡5s，反复洗板3次，最后将微孔板甩干；4加底物液：向待测样本孔加入显色剂A、B液各50μl，震荡仪震荡混匀，置于37℃隔水式恒温培养箱中，孵育15分钟；5加终止液：向待测样本孔加入终止液50μl，震荡仪震荡混匀；6检测：在酶标仪上设定450nm波长检测，以空白对照校零，再读取各孔OD值；实验结果：选取通过组织病理学检验确诊为肝癌患者血清48例，非肝癌患者血清79例，检测待测样本进行比对。用四格表统计结果如表1：特异性＝真阴性阴性总数×100％敏感性＝真阳性阳性总数×100％表1血液中BRIX1含量的测定通过表1结果可见，试剂盒特异性和敏感性均达到90％以上。突变体诱导产生的抗体灵敏度和特异性较原始的分别提高了23.2％和35.1％。序列表程张军南京诺唯赞医疗科技有限公司一种肝癌诊断标志物BRIX1及其应用4SIPOSequenceListing1.011059DNA人工序列ArtificialSequence1atggcggcaaccaagaggaaacggcgtggaggctttgcagttcaggcgaagaagccaaaa60agaaacgaaatagatgcggagccgccagctaagcggcacgccacagcagaggaggtggag120gaagaagagagggaccggatcccaggccccgtttgcaagggaaagtggaaaaataaggaa180cggattctcatctttgactccagaggaataaattttagaacaagacatttaatgcaggac240ttgagaatgttgatgcctcattctaaagcagatactaaaatggatcgtaaggataagcta300tttgtgattaacgaggtttgtgaaatgaagaactgtaataaatgcatctattttgaagct360aagaaaaaacaggatctctatatgtggctttcaaattcacctcacggaccatctgctaaa420ttccttgttcaaaatattcataccctcgctgaactgaagatgactggaaactgtttgaaa480ggttctcggccccttttgtcttttgaccctgcttttgatgaattaccacattatgctttg540ttaaaagaactcttaattcagatctttagtacaccacggtatcatcccaaaagccaacca600tttgtggaccacgtgtttactttcaccattttggataataggatatggtttcggaacttt660cagatcatagaagaagatgctgctcttgtagaaataggacctcgttttgtcttaaatctc720ataaagattttccagggaagttttggaggaccaactttatatgaaaatcctcactaccag780tcaccaaacatgcatcggcgtgtcataagatccatcacagctgcaaaatacagagagaaa840cagcaagtgaaagatgtgcaaaaactgagaaagaaagagccgaagactcttcttccacat900gatcccactgcagatgtttttgtaacaccagctgaggagaaaccaatagaaatacagtgg960gtaaaaccagagccaaaagttgatttgaaagcaagaaagaaacggatttacaaaaggcaa1020agaaaaatgaaacagaggatggacagtgggaaaacaaaa10592353PRT人工序列ArtificialSequence2MetAlaAlaThrLysArgLysArgArgGlyGlyPheAlaValGlnAla151015LysLysProLysArgAsnGluIleAspAlaGluProProAlaLysArg202530HisAlaThrAlaGluGluValGluGluGluGluArgAspArgIlePro354045GlyProValCysLysGlyLysTrpLysAsnLysGluArgIleLeuIle505560PheAspSerArgGlyIleAsnPheArgThrArgHisLeuMetGlnAsp65707580LeuArgMetLeuMetProHisSerLysAlaAspThrLysMetAspArg859095LysAspLysLeuPheValIleAsnGluValCysGluMetLysAsnCys100105110AsnLysCysIleTyrPheGluAlaLysLysLysGlnAspLeuTyrMet115120125TrpLeuSerAsnSerProHisGlyProSerAlaLysPheLeuValGln130135140AsnIleHisThrLeuAlaGluLeuLysMetThrGlyAsnCysLeuLys145150155160GlySerArgProLeuLeuSerPheAspProAlaPheAspGluLeuPro165170175HisTyrAlaLeuLeuLysGluLeuLeuIleGlnIlePheSerThrPro180185190ArgTyrHisProLysSerGlnProPheValAspHisValPheThrPhe195200205ThrIleLeuAspAsnArgIleTrpPheArgAsnPheGlnIleIleGlu210215220GluAspAlaAlaLeuValGluIleGlyProArgPheValLeuAsnLeu225230235240IleLysIlePheGlnGlySerPheGlyGlyProThrLeuTyrGluAsn245250255ProHisTyrGlnSerProAsnMetHisArgArgValIleArgSerIle260265270ThrAlaAlaLysTyrArgGluLysGlnGlnValLysAspValGlnLys275280285LeuArgLysLysGluProLysThrLeuLeuProHisAspProThrAla290295300AspValPheValThrProAlaGluGluLysProIleGluIleGlnTrp305310315320ValLysProGluProLysValAspLeuLysAlaArgLysLysArgIle325330335TyrLysArgGlnArgLysMetLysGlnArgMetAspSerGlyLysThr340345350Lys31059DNA智人homoSequence3atggcggcaaccaagaggaaacggcgtggaggctttgcagttcaggcgaagaagccaaaa60agaaacgaaatagatgcggagccgccagctaagcggcacgccacagcagaggaggtggag120gaagaagagagggaccggatcccaggccccgtttgcaagggaaagtggaaaaataaggaa180cggattctcatcttttcctccagaggaataaattttagaacaagacatttaatgcaggac240ttgagaatgttgatgcctcattctaaagcagatactaaaatggatcgtaaggataagcta300tttgtgattaacgaggtttgtgaaatgaagaactgtaataaatgcatctattttgaagct360aagaaaaaacaggatctctatatgtggctttcaaattcacctcacggaccatctgctaaa420ttccttgttcaaaatattcataccctcgctgaactgaagatgactggaaactgtttgaaa480ggttctcggccccttttgtcttttgaccctgcttttgatgaattaccacattatgctttg540ttaaaagaactcttaattcagatctttagtacaccacggtatcatcccaaaagccaacca600tttgtggaccacgtgtttactttcaccattttggataataggatatggtttcggaacttt660cagatca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权利要求：1.标志物BRIX1-1在制备用于诊断或辅助诊断肝癌产品中的应用。2.一种标志物BRIX1的突变体BRIX1-1，其特在于，序列如SEQIDNO.1所示，或者与SEQIDNO.1具有98％同一性的序列，优选的，如SEQIDNO.1所示或者与SEQIDNO.1具有99％同一性的序列。3.编码权利要求2所述的突变体BRIX1-1的核苷酸序列，如SEQIDNO.2所示。4.权利要求2所述的突变体BRIX1-1在生物药业和生物制剂中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，是用于诱导制备特异性识别标志物BRIX1的抗体中的应用。6.一株分泌特异性识别标志物BRIX1的抗体的杂交瘤细胞株BRI，保藏编号CCTCCNO:C201969。7.权利要求6所述杂交瘤细胞株BRI分泌的抗体mAb-BRIX1。8.一种组合物，包括权利要求7所述的抗体mAb-BRIX1，和药学上常用的辅料。9.包含权利要求7所述的抗体mAb-BRIX1的试剂盒。10.权利要求7所述的抗体mAb-BRIX1、权利要求8所述的组合物或权利要求9所述的试剂盒在制备肝癌诊断或辅助诊断试剂、制备治疗肝癌药物或用于研究肝癌的生物制剂中的应用。

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