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申请/专利权人：南通大学
摘要：本发明公开了一种PDGFB基因启动子活性报告质粒的构建方法，提取正常小鼠外周血液，利用DNA抽提试剂盒提取小鼠基因组DNA，检测DNA纯度以及完整性后备用；数据库检索，得到小鼠PDGFB基因的启动子序列；PCR扩增PDGFB基因启动子序列，引物两端加入相应限制性内切酶序列及保护碱基；扩增产物经DNA凝胶回收试剂盒回收纯化；回收纯化的PCR产物和荧光素酶报告质粒载体pGL3‑Basic‑vector，分别用KpnI、HindIII双酶切；酶切产物经凝胶回收试剂盒回收纯化；回收目的基因片段和载体片段，用T4连接酶16℃连接过夜；次日将连接产物转化感受态大肠杆菌，涂布固体LB培养基平板过夜。
主权项：1.一种PDGFB基因启动子活性报告质粒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、提取正常小鼠外周血液，利用血液DNA抽提试剂盒提取小鼠基因组DNA，检测DNA纯度以及完整性后备用；S2、数据库检索，小鼠PDGFB基因的转录起始位点TSS区域长600bp，即-499-100bp的启动子序列；S3、PCR扩增PDGFB基因启动子序列，引物两端加入相应限制性内切酶序列及保护碱基；KpnI的序列如SEQID:NO:3所示；HindⅢ的序列如SEQID:NO:4所示；S4、扩增产物经DNA凝胶回收试剂盒回收纯化；S5、回收纯化的PCR产物和荧光素酶报告质粒载体pGL3-Basic-vector，分别用KpnI、HindIII双酶切；S6、酶切产物经凝胶回收试剂盒回收纯化；S7、回收目的基因片段和载体片段，用T4连接酶16℃连接过夜；S8、次日将连接产物转化感受态大肠杆菌，涂布固体LB培养基平板过夜；S9、挑单克隆菌落于LB液体培养基扩大培养；S10、质粒小量提取试剂盒提取质粒。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南通大学 一种PDGFB启动子活性报告质粒的构建方法
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