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申请/专利权人：广东海洋大学

摘要：本发明涉及一种利用寄主基质分离沉香树皮腐病病原菌的方法，该方法包括以下步骤：1从沉香的种植地采集发病样本；2沉香树寄主基质的预处理：将沉香树枝条切段、浸泡过滤水分；3分装试管，将切段枝条装入试管，置于高压蒸汽灭菌锅灭菌备用；4沉香树茎部病原真菌的分离，剪取病样组织病健交界处的组织块，置于试管中于恒温培养箱培养；5马铃薯葡萄糖琼脂培养基上纯化，挑取生长末端的菌丝块移入培养基上培养得纯培养物；6致病性测定；7病菌形态观察；本方法使用寄主基质为培养基，能阻止细菌的漫延，使生长速度较快的病原菌菌丝可以超越生长速度较慢的微生物，有效地与混杂的微生物分离开来，从而获得纯的菌株。

主权项：1.一种利用寄主基质分离沉香树皮腐病病原菌的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：1发病样本采集从沉香树种植地采集沉香树发病样品，备用；2沉香树寄主基质的预处理取干枯、无霉变的沉香树枝条，切段1～2cm长，置于水中浸泡12h，用纱布过滤水分，双手拧干备用；3分装试管将沥干水分的切段枝条装入试管中，料量低于试管口2～3cm，最后压平料面，清洁试管口内壁和试管外壁，试管口塞上棉花，然后用报纸封口；将装有培养料的试管置于高压蒸汽灭菌锅灭菌备用；4沉香树茎部病原真菌的分离在超净工作台上，用灭菌的剪刀或刀片，剪取沉香树病样组织病健交界处2mm×2mm的组织块，将其置于培养料试管内，立即塞上棉花，用报纸封口处理；置于恒温培养箱培养，观察菌丝生长状况；5马铃薯葡萄糖琼脂培养基上纯化选取长有与发病样本病症菌丝相近的试管，从中间截断，挑取生长末端的菌丝块移入PDA培养基上培养2～3d，便获得纯培养物；6致病性测定接种用的菌饼：将上述在PDA培养基上生长的纯培养物，用无菌打孔器打出直径5mm菌饼，备用；同时将PDA培养基也打同样大小的琼脂饼做对照用；本方法利用菌饼法进行伤口接种；选取健康的沉香树枝条用75％的酒精进行表面消毒，用灭菌的刀在枝条表皮上划一刀，在伤口处附上菌饼，而对照组则附上琼脂饼；各5个重复；将处理好的枝条用盒子保湿，观察期为7天；7天后，可观察到枝接种处表皮出现浅褐色病斑，并长满白色菌丝，症状与发病样本一致，重新分离白色菌丝，显微镜检查其形态与接种的纯培养物一致，而对照组的有伤口处理处均无症状表现；7病菌形态观察上述纯培养物在PDA上生长迅速，3天即长满培养皿，菌落最初为白色，有丰富的气生菌丝，与发病样本病症一致；菌丝随后变为浅黄色，并产生大量带有孢子的孢子囊，孢子囊圆形，光滑，直立，不分枝；孢囊孢子呈椭圆形，褐色或淡褐色，孢子壁上有条状直纹，大小为长9～24μm×宽8～13μm；形态学特征与瓜笄霉choanephoracucurbitarum一致，因此鉴定该致病菌为瓜笄霉。

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