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申请/专利权人:辽宁成大生物股份有限公司
摘要:本发明涉及在病毒疫苗制品中去除宿主DNA及宿主蛋白的方法,具体涉及利用多模式层析介质Captoadhere去除乙脑疫苗制品中残留宿主DNA的方法。所述的利用多模式层析介质Captoadhere去除乙脑疫苗制品中残留宿主DNA的方法,包括以下步骤:将乙脑疫苗浓缩灭活液进行多模式介质Captoadhere层析,使DNA与宿主蛋白牢固吸附在多模式层析介质Captoadhere上,而病毒蛋白直接穿透,再将收集的纯化液进行凝胶过滤层析,从而达到去除宿主DNA与宿主蛋白的目的。将Captoadhere多模式层析介质应用于病毒类疫苗的纯化中,采用流穿模式,即加样时目的蛋白流穿,杂质吸附在层析柱上,达到纯化目的。在保证疫苗抗原原始结构的前提下,有效去除宿主DNA与宿主蛋白的含量,突破疫苗制品的质量瓶颈,提高产品质量标准。
主权项:1.一种利用多模式层析介质Captoadhere去除乙脑疫苗制品中残留宿主DNA的方法,其特征在于,将乙脑疫苗浓缩灭活液进行多模式介质Captoadhere层析,使DNA与宿主蛋白牢固吸附在多模式层析介质Captoadhere上,而病毒蛋白直接穿透,再将收集的纯化液进行凝胶过滤层析,从而达到去除宿主DNA与宿主蛋白的目的,具体包括以下步骤:使用缓冲液pH6.0~8.0和NaCl0.1molL~1.0molL平衡多模式层析介质Captoadhere至紫外、电导平衡,然后将乙脑疫苗浓缩灭活液加载到多模式层析介质Captoadhere中,宿主DNA与宿主蛋白牢固吸附在多模式层析介质Captoadhere上,而乙脑病毒蛋白直接穿透出来,紫外检测波长280nm,收集吸收峰,当样品全部加载后,继续用缓冲液pH6.0~8.0、NaCl0.1molL~1.0molL洗脱,直到紫外吸收值降到基线,收集的穿透峰为一步纯化液;再将一步纯化液经过凝胶过滤层析,收集第一个吸收峰,即乙脑病毒蛋白最终纯化液。
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