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申请/专利权人：格礼卡姆股份公司

摘要：一种基本上由6’‑SL、LNnT和LSTc组成的人乳低聚糖的混合物，其通过在α2,6‑转唾液酸酶的存在下对6’‑SL和LNnT进行处理而制得。

主权项：1.一种人乳低聚糖的混合物，其基本上由6’-O-唾液酸基乳糖、乳-N-新四糖和唾液酸基乳-N-四糖c组成。

全文数据：6’-SULNnT和LSTc的三元混合物技术领域[0001]本发明涉及人乳低聚糖HMO的三元混合物，特别是6’-0-唾液酸基乳糖6’-SL、乳-N-新四糖LNnT和唾液酸基乳-N-四糖cLSTc的混合物，用于制备该三元混合物的方法，以及该三元混合物在人类健康中的应用。背景技术[0002]HMO已经成为近年来极为关注的课题，因为其在人类机体中发生的许多生物学过程中发挥作用。哺乳动物乳汁包含这些复杂的低聚糖中的至少130种Urashima等人:MiIk01igosaccharides,NovaBiomedicalBooks1NewYork,2011,ISBN:978-1-61122-831-1〇[0003]此前，HMO的唯一来源是主要包含水、以及55-70gl乳糖、24-59gl脂质、约13gl蛋白质、5-15glHMO和约1.5gl矿物质的哺乳动物乳汁。[0004]然而，在过去十年中，开发用于合成这些低聚糖的方法的努力显著增加，因为其在许多人生物学过程中发挥作用。在这方面，已经开发出通过微生物发酵、酶法、化学合成或这些技术的组合来制备HMO的方法。例如，通过化学方法，可如WO2011100980和WO2013044928中所述制备LNnT，可如WO2012155916和WO2013044928中所述合成LNT，可如WO2013091660中所述制备LNT和LNnT的混合物，可如WO2010115934和WO2010115935中所述制备2’-FL，可如W02013139344中所述制备3-FL，且可如WO2010100979中所述制备6’-SL及其盐。作为生物技术方法的实例，WO0104341和W02007101862描述了如何使用基因改造的大肠杆菌E.coli制备任选由岩藻糖或唾液酸取代的核心人乳低聚糖。作为酶法的一个实例，可如EP-A-577580中所述制备唾液酸化低聚糖。[0005]还已经致力于开发用于酶法合成HMO低聚糖的混合物，而不必如WO2012156897和TO2012156898中所述合成混合物的所有低聚糖组分的方法。这些方法已经提供了包含多种不同低聚糖的反应混合物。[0006]然而，仍在寻求更好的用于合成HMO的混合物的方法。[0007]有证据表明，人消化道中称为微生物组microbiome的微生物的定居群落在健康和疾病中起着重要作用。当微生物组的正常组成失去平衡时，人宿主可能会遭受后果。最近的研究涉及到例如癌症、肥胖、炎性肠病、银肩病、哮喘、以及甚至可能是自闭症的多种疾病中的微生物组的失衡。据信HMO积极地调节微生物组，并且将它们用于此目的越来越感兴趣。然而，HMO的显著多样性，加上缺乏可得性，已经阻碍对各个HMO的特定功能的研究。明确需要特定的HMO或HMO的组合从而以期望的方式调节微生物组，以便解决特定的人健康问题。发明内容[0008]本发明的第一方面涉及一种基本上由6’-0-唾液酸基乳糖6’-SL、乳-N-新四糖LNnT和唾液酸基乳-N-四糖cLSTc组成的HMO的第一混合物。有利的是，在该第一HMO混合物中，LSTc相对于6’-SL+LNnT的摩尔比为至少1:18，有利地为至少1:8，更有利地为至少1:5,甚至更有利地为至少1:3。同样有利的是，在第一混合物中，6’-SL相对于LNnT的摩尔比为0.18-5.5，更有利地为0.3-3，还更有利地为约1。[0009]本发明的第二方面涉及一种通过在α2,6-转唾液酸酶的存在下，使6’-SL供体和LNnT受体进行反应，然后从反应介质中除去乳糖和α2，6-转唾液酸酶来制备第一HMO混合物的方法。有利的是，该方法包括使用摩尔比为1:3至3:1、有利地为1:2至2:1、更有利地为1:1的6’-SL和LNnT，a2,6-转唾液酸酶对于6’-SL和LNnT的反应的转化率为至少20%至多55%，有利地为至少30%，更有利地为至少40%，甚至更有利地为至少45%。[0010]本发明的第三方面涉及一种基本上由6’-SL、LNnT、LSTC和乳糖组成的HMO的第二混合物。有利的是，在该第二混合物中：[0011]_6’-SL+LNnT相对于LSTC的摩尔比为2-18,并且[0012]-乳糖相对于LSTc的摩尔比为约1。[0013]更有利的是，6’-SL与LSTc的摩尔比以及LNnT与LSTc的摩尔比中之一不超过4。甚至更有利地，第二HMO混合物的6’-SL与LNnT的摩尔比为0.18-5.5。[0014]本发明的第四方面涉及一种通过在a2,6-转唾液酸酶的存在下，使6’-SL供体和LNnT受体进行反应，然后从反应介质中除去a2,6-转唾液酸酶来制备第二HMO混合物的方法。所得反应混合物是本发明的第二HMO混合物。[0015]本发明的第五方面涉及一种用于治疗病毒和或细菌感染的抗感染组合物，其包含6’-SULNnT和LSTc。该组合物包含具有新性质和生物学活性的多种不同HMO的混合物。具体而言，该组合物增加人的微生物组的双歧杆菌^Bifidobacterium丰度。此外，该组合物抑制病原体结合，从而保护宿主免受感染，特别是呼吸道感染。该组合物也可用于治疗和或降低人的广泛范围的病毒和或细菌感染、特别是呼吸道感染的风险。该抗感染组合物有利地是本发明的第一或第二混合物，更有利地是第一混合物，如上所述。[0016]本发明的第六方面涉及一种调节人、特别是非婴儿个体的微生物组以增加双歧杆菌丰度的方法。该方法包括向所述人施用6’-SULNnT和LSTc，有利地施用本发明的第一或第二混合物，更有利地施用第一混合物，如上所述。[0017]本发明的第七方面涉及一种预防或治疗人、特别是非婴儿个体的病毒和或细菌感染、特别是呼吸道感染的方法。该方法包括向人施用6’-SL、LNnT和LSTc的混合物，有利地施用本发明的第一或第二混合物，更有利地施用第一混合物，如上所述。附图说明[0018]以下附图意在进一步示例说明本发明。它们不意在限制本发明的主题。[0019]图1:示出3个α2，6-转唾液酸酶的序列和比对，该3个α2，6-唾液酸基转移酶为：由其信号肽（A2-15截短的鳆发光杆菌P.lei0gnathiJT-SHIZ-119唾液酸基转移酶（SEQIDNo.l，由其信号肽（Δ2-15截短的鳆发光杆菌JT-SHIZ-145唾液酸基转移酶（SEQIDNo.2，和由其信号肽（Δ2-15截短的美人鱼发光杆菌P.damselaeJT0160唾液酸基转移酶（SEQIDΝο·3。通过使用CLUSTALOmega1.2.1http:www.ebi.ac.ukToolsmsaclustalo进行多重序列比对MSA来比对序列。[0020]图2:示出2个α2，6-唾液酸基转移酶的序列和比对，该2个α2，6-唾液酸基转移酶为：由其信号肽（A2-15截短的鳆发光杆菌JT-SHIZ-119唾液酸基转移酶（为SEQIDN0.1，和由其信号肽（Δ2-15截短的鳆发光杆菌JT-SHIZ-145唾液酸基转移酶（SEQIDNo·2。通过使用EMBOSSNeedlehttp:www.ebi·ac.ukToolspsaemboss_needle进行成对序列比对来比对序列。[0021]图3:示出2个α2，6-唾液酸基转移酶的序列和比对，该2个α2，6-唾液酸基转移酶为：由其信号肽（A2-15截短的鳆发光杆菌JT-SHIZ-119唾液酸基转移酶（为SEQIDNo.l，和由其信号肽（Δ2-15截短的美人鱼发光杆菌JT0160唾液酸基转移酶（SEQIDΝο·3。通过使用EMBOSSNeedlehttp:www.ebi.ac.ukToolspsaemboss_needle进行成对序列比对来比对序列。具体实施方式[0022]根据本发明，已经令人惊讶地发现，6’-SL、LNnT和LSTc的混合物具有抗感染活性，因此可以用作抗感染组合物，例如通过微生物组的特异性调节和通过防止病原体与上皮细胞结合来治疗细菌感染。该混合物增加微生物组的双歧杆菌丰度。该混合物还减少微生物组的厚壁菌Firmicutes丰度、特别是梭状芽孢杆菌属Clostridiasp.的丰度。该混合物还结合一系列呼吸道病原体，抑制这些病原体与上皮细胞结合。通过这种方式，该混合物提供一种免受感染、特别是呼吸道感染的保护形式。[0023]本发明涉及合成HMO混合物。术语“合成混合物”或“合成组合物”是指人工制备的混合物或组合物，并且优选是指包含至少一种经化学地和或生物学地（例如通过化学反应、酶促反应或重组地离体exvivo制备的化合物的混合物或组合物。在这方面，“合成”用作与“天然的”相反，并且是指本发明的合成混合物或组合物与天然组合物或混合物例如人乳不同，或者混合物或组合物的至少一种HMO不是源自天然来源例如人乳。[0024]第一HMO混合物及其制备[0025]本发明的混合物可以是基本上由6’-SULNnT和LSTc组成的HMO的第一混合物。第一混合物中HMO的摩尔比可以变化。在一个实施方式中，LSTc相对于6’-SL+LNnT组合的摩尔比为至少1:18。在另一个实施方式中，该比例可以是至少1:8。在一些实施方式中，可优选第一混合物中LSTc相对于6’-SL+LNnT组合的某些比例，例如至少1:5或至少1:3。在一些其它实施方式中，第一HMO混合物中6’-SL相对于LNnT的摩尔比可为0.18-5.5或0.3-3、优选为约1。[0026]第一HMO混合物可以通过如下方法容易地获得，该方法包括用α2,6-转唾液酸酶处理6’-SL供体和LNnT受体，然后从反应介质中除去乳糖和α2,6-转唾液酸酶。在一个实施方式中，该方法包括以下步骤:使6’-SL和LNnT以优选1:3至3:1或1:2至2:1、例如约1:1的摩尔比与α2，6_转唾液酸酶接触，α2，6_转唾液酸酶对于6’-SL和LNnT的反应的转化率为至少20%、至多约55%，优选为至少30%，例如至少30%至约50%，至少40%或至少45%。然后对如此制备的包含LSTc、乳糖、未反应的6’-SULNnT和α2,6-转唾液酸酶的反应混合物进行常规纯化步骤以除去6’-SULNnT和LSTc以外的物质，S卩α2,6-转唾液酸酶和乳糖。如果通过原位（insitu酶促反应获得混合物，则可以使α2，6-转唾液酸酶失活并除去例如通过变性然后离心或超滤），以制备基本上由6’-SL、LNnT、LSTc和乳糖组成的混合物。然后，可以例如通过级联超滤和或纳滤将该混合物中的乳糖与6’-SULNnT和LSTc分离，或者首先可以用乳糖酶处理乳糖以将其降解成葡萄糖和半乳糖，之后可以通过超滤和或纳滤使它们与6’-SULNnT和LSTc分离。在重组地制备包含LSTc、乳糖、未反应的6’-SULNnT和α2，6-转唾液酸酶的混合物的情况下，即通过使用表达重组α2,6_转唾液酸酶的基因改造微生物如细菌进行的发酵方法，可以使用以下步骤进行HMO混合物的纯化:从发酵液除去细胞材料，然后除去非碳水化合物颗粒和污染物例如盐、荷电分子、蛋白质、DNA、着色焦糖体等，以制备基本上由3’-SL、3-FL、FSL和乳糖组成的混合物。可以如上所述进行乳糖的分离。[0027]第二HMO混合物及其制备[0028]本发明的混合物也可以是基本上由6’-SL、LNnT、LSTc和乳糖组成的HMO的第二混合物。优选地，在该第二混合物中：[0029]-6’-SL+LNnT相对于LSTc的摩尔比为2-18,并且[0030]-乳糖相对于LSTc的摩尔比为约1。[0031]更优选地，6’-SL与LSTc的摩尔比和LNnT与LSTc的摩尔比中之一不超过4。[0032]本发明的第二HMO混合物可以通过进行如上所述的方法而获得，该方法不包括从获得的HMO混合物中除去乳糖的步骤。在一个实施方式中，6’-SL和LNnT以优选1:3至3:1、更优选1:2至2:1、甚至更优选为1:1的摩尔比借助α2,6_转唾液酸酶进行反应，其中转化率为至少20%，有利地为至少30%，更有利地为至少40%，甚至更有利地为至少45%。优选地，在所得第二HMO混合物中，6’-SL与LNnT的摩尔比为0.3-3。[0033]第一和第二HMO混合物的实施方式[0034]当以6’-SL与LNnT的摩尔比为2:1至1:2并且转化率为20-50%进行本发明的方法时，可以制备6’-SL+LNnT与LSTc摩尔比为2-13并且6’-SL与LNnT的摩尔比为0.33-3的第一或第二HMO混合物。[0035]当以6’-SL与LNnT的摩尔比为1:1并且转化率为20-45%进行该方法时，可以制备6’-SL+LNnT与LSTc摩尔比为2.44-8并且6’-SL与LNnT的摩尔比为1的第一或第二HMO混合物。[0036]当以6’-SL与LNnT的摩尔比为3:1至1:3并且转化率为30-50%进行该方法时，可以制备6’-SL+LNnT与LSTc摩尔比为2-12并且6’-SL与LNnT的摩尔比为0.2-5的第一或第二HMO混合物。[0037]当以6’-SL与LNnT的摩尔比为2:1至1:2并且转化率为30-50%进行该方法时，可以制备6’-SL+LNnT与LSTc摩尔比为2-8并且6’-SL与LNnT的摩尔比为0.33-3的第一或第二HMO混合物。[0038]当以6’-SL与LNnT的摩尔比为1:1并且转化率为30-45%进行该方法时，可以制备6’-SL+LNnT与LSTc摩尔比为2.44-5并且6’-SL与LNnT的摩尔比为1的第一或第二HMO混合物。[0039]当以6’-SL与LNnT的摩尔比为3:1至1:3并且转化率为25-35%进行该方法时，可以制备6’-SL+LNnT与LSTc摩尔比为3.7-14并且6’-SL与LNnT的摩尔比为0.25-4.1的第一或第二HMO混合物。[0040]当以6’-SL与LNnT的摩尔比为2:1至1:2并且转化率为25-35%进行该方法时，可以制备6’-SL+LNnT与LSTc摩尔比为3.7-10并且6’-SL与LNnT的摩尔比为0.39-2.54的第一或第二HMO混合物。[0041]当以6’-SL与LNnT的摩尔比为1:1并且转化率为25-35%进行该方法时，可以制备6’-SL+LNnT与LSTc摩尔比为3.7-6并且6’-SL与LNnT的摩尔比为1的第一或第二HMO混合物。[0042]当以6’-SL与LNnT的摩尔比为3:1至2:1并且转化率为30-50%进行该方法时，可以制备6’-SL+LNnT与LSTc摩尔比为4-12并且6’-SL与LNnT的摩尔比为2.43-5的第一或第二HMO混合物。[0043]当以6’-SL与LNnT的摩尔比为2:1至1:1并且转化率为20-45%进行该方法时，可以制备6’-SL+LNnT与LSTc摩尔比为2.44-13并且6’-SL与LNnT的摩尔比为1-2.82的第一或第二HMO混合物。[0044]当以6’-SL与LNnT的摩尔比为1:1至1:2并且转化率为20-45%进行该方法时，可以制备6’-SL+LNnT与LSTc摩尔比为2.44-13并且6’-SL与LNnT的摩尔比为0.35-1的第一或第二HMO混合物。[0045]当以6’-SL与LNnT的摩尔比为1:2至1:3并且转化率为30-50%进行该方法时，可以制备6’-SL+LNnT与LSTc摩尔比为4-12并且6’-SL与LNnT的摩尔比为0.20-0.41的第一或第二HMO混合物。[0046]本发明的HMO混合物的酶促制备[0047]根据本发明，术语“α2,6-转唾液酸酶”是指能够将唾液酸残基转移至低聚糖受体中的半乳糖单元优选为末端半乳糖单元）的6位的任何野生型或工程改造的唾液酸酶。为了制备第一或第二HMO混合物，α2，6-转唾液酸酶对于LNnT受体应该是区域选择性的，因为它含有两个半乳糖基单元。用于该目的的α2,6_转唾液酸酶对于LNnT的末端半乳糖残基应该是区域选择性的，即LSTc形成描绘为化合物Α优于化合物B和或化合物C的形成参见方案1。因此，当使用区域选择性α2,6_转唾液酸酶时，应该在显著的副产物形成之前停止反应。这个时间点可以通过公知的酶动力学测量而容易地确定，并且在最特异的酶的情况下，当以等摩尔比使用6’-SL和LNnT时，甚至在45%的转化率下也观察不到副产物。当过量使用6’-SL或LNnT时，没有副产物发生的转化率可能更高。[0049]方案I[0050]在制备本发明的HMO混合物的过程中使用的α2,6_转唾液酸酶可以是具有α2,6_转唾液酸酶活性的任何野生型酶，比如来自美人鱼发光杆菌PhotobacteriumdamselaeJT0160US5827714，US6255094，Yamamoto等人J.Biochem.123,941998、发光杆菌属Photobacteriumsp.JT-ISH-224US7993875，US8187838，Tsukamoto等人J.Biochem.143,1872008、鳆发光杆菌JT-SHIZ-145US8187853，US8372617,Yamamoto等人Glycobiology17,11672007或鳆发光杆菌JT-SHIZ-119US2012184016，Mine等人Glycobiology20,1582010的α2,6_唾液酸基转移酶。[0051]在制备本发明的HMO混合物的过程中使用的α2,6_转唾液酸酶优选具有与SEQIDNo.1的氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列，并且其包含以下至少一种：[0052]-在156位的氨基酸选自Ser、Thr、Cys、Tyr、AsruGln或Trp，优选Ser、CysSTyrjPI或[0053]-在161位的氨基酸选自Ala、Val、lie、Leu、Phe、Tyr、Trp或Gly，优选PheSGlyjPI或[0054]-在180位的氨基酸选自48口、48]1、6111，优选48。;和或[0055]-在186位的氨基酸选自Val、lie、Leu、Met、Phe、Tyr、Trp、Ser、Cys或Thr，优选Tyr、Cys或Leu;和或[0056]-在218位的氨基酸选自\^1、116、1^11、]^1:、？116、15^、1'印、〇5^、617或1'111'，优选116、Val、Phe或Tyr;和或[0057]-在222位的氨基酸选自Gin、Asp、Glu、Cys、Thr、Phe、Tyr、Trp、Arg、Lys或His，优选Cys、Asp、Arg或Phe;和或[0058]-在235位的氨基酸选自厶找、]^8、361'、〇5^、厶13、\%1、116或1^11，优选厶坪、]^8、〇5^或Val;和或[0059]-在242位的氨基酸选自Arg、His或Lys，优选His;和或[0060]-在261位的氨基酸选自His、Lys、Asp、Glu、Ala、Val、Leu或Phe，优选Asp、Phe、His或Val;和或[0061]-在315位的氨基酸选自Ser、Thr或Cys，优选Cys;和或[0062]-在342位的氨基酸选自Ser或Cys，优选Cys;和或[0063]-在349位的氨基酸选自Ser、Thr或Cys，优选Ser或Cys;和或[0064]-在350位的氨基酸选自Ser、Thr、Cys、Tyr、Trp或Phe，优选Ser、Tyr、Phe或CysjPI或[0065]-在356位的氨基酸选自Ala、Val、IIe、Leu、Phe或Trp，优选Val或Phe;和或[0066]-在438位的氨基酸选自Arg、His或Lys，优选His，[0067]其中所述位置通过使用比较算法将所述氨基酸序列与SEQIDNo.1进行比对来定义。[0068]因此，在制备本发明的HMO混合物的过程中使用的α2，6_转唾液酸酶优选是具有与SEQIDNo.1基本上相同（即与SEQIDNo.1的氨基酸序列具有至少60%同一性）的氨基酸序列的突变的α2,6-转唾液酸酶，并且该氨基酸序列在以下一个或多个氨基酸位置对应于氨基酸序列与SEQIDNo.1的比对来编号）处突变（即一个氨基酸已经由另一个氨基酸取代：[0069]-156位取代为Ser、Thr、Cys、Tyr、AsruGln或Trp，优选为Ser、Cys或Tyr;[0070]-161位取代为Ala、Val、116、1^11、？116、15^、1'印或617，优选为?116或617;[0071]-180位取代为Asp、AsruGln，优选为Asp;[0072]-186位取代为Val、lie、Leu、Met、Phe、Tyr、Trp、Ser、Cys或Thr，优选为Tyr、Cys或Leu;[0073]-218位取代为\%1、11〇、1^11、]\^1:、？116、丁5^、1'印、〇5^、617或1'111'，优选为116、\%1、PheSTyr;[0074]-222位取代为Gln、Asp、Glu、Cys、Thr、Phe、Tyr、Trp、Arg、Lys或His，优选为Cys、Asp、Arg或Phe;[0075]-235位取代为△坪、把8、361'、〇}^、厶13、\^1、116或1^11，优选为厶坪、]^8、〇5^或\^1;[0076]-242位取代为Arg、His或Lys，优选为His;[0077]-261位取代为His、Lys、Asp、Glu、Ala、Val、Leu或Phe，优选为Asp、Phe、His或Val;[0078]-315位取代为Ser、Thr或Cys，优选为Cys;[0079]-342位取代为Ser或Cys，优选为Cys;[0080]-349位取代为Ser、Thr或Cys，优选为Ser或Cys;[0081]-350位取代为Ser、Thr、Cys、Tyr、Trp或Phe，优选为Ser、Tyr、Phe或Cys;[0082]-356位取代为Ala、Val、IIe、Leu、Phe或Trp，优选为Val或Phe;或[0083]-438位取代为Arg、His或Lys，优选为His。[0084]SEQIDNo.1的氨基酸序列对应于由其信号肽（Δ2-15截短的鳆发光杆菌JT-SHIZ-119唾液酸基转移酶的氨基酸序列。[0085]与野生型非突变的）亲本酶或其它相应野生型（非突变的）酶相比，上述定义的突变的α2,6_转唾液酸酶显示出提高的区域选择性，该野生型亲本酶具有与SEQIDNo.1相同的氨基酸序列，其它相应野生型酶具有与SEQIDNo.1基本上相同的氨基酸序列，并且突变体来自野生型酶。[0086]此外，根据本发明的突变的α2，6-转唾液酸酶不仅显示出转唾液酸酶、优选α2，6-转唾液酸酶活性，而且还显示出唾液酸基转移酶、优选α2，6-唾液酸基转移酶活性。[0087]根据本发明，在两个或更多个核酸或氨基酸序列的上下文中的术语“基本同一性”和“基本上相同”优选是指当在比较窗或者对核酸或氨基酸的指定序列比较和比对以获得最大对应性时，两个或更多个序列相同或者具有至少约60%的共同核苷酸或氨基酸残基即，序列具有至少约60%同一性）。核酸或氨基酸序列的同一性百分比能够使用具有默认参数的BLAST2.0序列比较算法或通过手动比对和目视检查来测量（参见例如http:www.ncbi.nlm.nih.govBLAST。根据本发明，i与SEQIDNo.1的多肽“基本上相同”的多肽片段或ii编码多肽片段并且与编码SEQIDNo.1的多肽的核酸序列“基本上相同”的核酸序列的同一性百分比，优选为与SEQIDNo.1至少65%相同、更优选为至少70%、还更优选为至少75%、甚至更优选为至少80%、还更优选为至少85%、还甚至更优选为至少90%、还甚至更优选为至少92%、尤其是至少93%、更特别是至少94%、甚至更特别是至少95%、还甚至更特别是至少96%、特别是至少97%、更特别是至少98%、并且最特别是至少99%相同。该定义也适用于测试序列的补充compliment以及具有缺失和或添加的序列、以及具有取代的序列。在这方面，参照SEQIDNo.1的本发明的新型工程改造突变的转唾液酸酶的氨基酸序列中的突变位置是指通过使用蛋白质序列比较算法或通过上述手动比对和目视检查对测试转唾液酸酶序列与SEQIDNo.1进行比对而定义该位置。图1-3示出这种比对序列的实例。适用于确定百分比同一性、序列相似性和进行比对的算法的实例是BLAST2·2·20+算法，其描述于Altschul等人NucL·AcidsRes·25，33891997。使用BLAST2.2.20+来确定本发明的核酸和蛋白质的百分比序列同一性。进行BLAST分析的软件可通过国家生物技术信息中心http:www.ncbi.nlm.nih.gov公开获得。序列比对算法的实例是CLUSTALOmegahttp:www.ebi.ac.ukToolsmsaclustalo，EMB0SSNeedlehttp:www.ebi.ac.ukToolspsaemboss_needle,MAFFThttp:mafft.cbrc.jpalignmentserver或者MUSCLEhttp:www.ebi.ac.ukToolsmsamuscle〇[0088]具有与SEQIDNo.I基本上相同的氨基酸序列，即与SEQIDNo.I具有至少约60%的序列同一性通过BLAST测定的优选的野生型α2，6-唾液酸基转移酶在表1中列出。[0089][0090]表I[0091]优选地，可以突变成具有区域选择性提高的α2，6-转唾液酸酶活性的具有与SEQIDNO.1基本上相同的氨基酸序列的α2,6-唾液酸基转移酶是来自鳆发光杆菌JT-SHIZ-119的唾液酸基转移酶或其Δ2-15截短的变体、来自鳆发光杆菌JT-SHIZ-145的唾液酸基转移酶或其△2-15截短的变体、或者来自美人鱼发光杆菌JT0160的唾液酸基转移酶或其△2-15截短的变体，更优选地为来自鳆发光杆菌JT-SHIZ-119的唾液酸基转移酶或其△2-15截短的变体。[0092]在制备本发明的HMO混合物的过程中使用的突变的α2,6-转唾液酸酶中，与SEQIDΝ0.1的氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列优选为来自鳆发光杆菌JT-SHIZ-119的唾液酸基转移酶或其A2-15截短的变体、来自鳆发光杆菌JT-SHIZ-145的唾液酸基转移酶或其Δ2-15截短的变体、或者来自美人鱼发光杆菌JT0160的唾液酸基转移酶或其△2-15截短的变体，并且该氨基酸序列具有以下突变对应于氨基酸序列与SEQIDNo.1的比对来编号）：[0093]-在156位的Gly取代为Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Gln或Trp，优选为Ser、CysSTyr;和或[0094]-在161位的Gln或Pro取代为Ala、Val、lie、Leu、Phe、Tyr、Trp或Gly，优选为Phe或Gly;和或[0095]-在180位的Glu取代为Asp、Asn、Gln，优选为Asp，和或[0096]-在186位的Ala或Gly取代为Val、lie、Leu、Met、Phe、Tyr、Trp、Ser、Cys或Thr，优选为Tyr、Cys或Leu;和或[0097]-在218位的Ala或Ser取代为Val、lie、Leu、Met、Phe、Tyr、Trp、Cys、Gly或Thr，优选Slle、Val、PheSTyrjPS[0098]-在222位的Asn或Ser取代为Gin、Asp、Glu、Cys、Thr、Phe、Tyr、Trp、Arg、Lys或His，优选为Cys、Asp、Arg或Phe;和或[0099]-在235位的Lys或Thr取代为Arg、His、Ser、Cys、Ala、Val、IIe或Leu，优选为Arg、His、Cys或Val;和或[0100]-在242位的Val或Leu取代为Arg、His或Lys，优选为His;和或[0101]-在261位的Arg或IIe取代为His、Lys、Asp、Glu、Ala、Val、Leu或Phe，优选为Asp、Phe、His或Val;和或[0102]-在315位的Leu取代为Ser、Thr或Cys，优选为Cys;和或[0103]-在342位的Thr取代为Ser或Cys，优选为Cys;和或[0104]-在349位的Gly取代为Ser、Thr或Cys，优选为Ser或Cys;和或[0105]-在350位的Gly取代为Ser、Thr、Cys、Tyr、Trp或Phe，优选为Ser、Tyr、Phe或Cys;和或[0106]-在356位的Tyr取代为八1、¥1、1、1^11、？1^或1'印，优选为¥1或?1^;和或[0107]-在438位的Pro取代为Arg、His或Lys，优选为His。[0108]优选地，在突变的ct2,6-转唾液酸酶中，与SEQIDNO.1的氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列是与SEQIDNO.1的氨基酸序列至少90%相同的氨基酸序列，更优选为来自鳆发光杆菌JT-SHIZ-119的唾液酸基转移酶或其Λ2-15截短的变体、或者来自鳆发光杆菌JT-SHIZ-145的唾液酸基转移酶或其△2-15截短的变体、特别是来自鳆发光杆菌JT-SHIZ-119的唾液酸基转移酶或其△2-15截短的变体的氨基酸序列，并且其包含在以下氨基酸位置对应于氨基酸序列与SEQIDNo.1的比对来编号处的突变：[0109]-在156位的Gly取代为Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Gln或Trp，优选为Ser、Cys或Tyr;和或[0110]-在161位的Gln取代为Ala、Val、Ile、Leu、Phe、Tyr、Trp或Gly，优选为Phe或Gly;和或[0111]-在180位的Glu取代为Asp、Asn、Gln，优选为Asp，和或[0112]-在186位的Ala或Gly取代为Val、lie、Leu、Met、Phe、Tyr、Trp、Ser、Cys或Thr，优选为Tyr、Cys或Leu;和或[0113]-在218位的Ala取代为Val、lie、Leu、Met、Phe、Tyr、Trp、Cys、Gly或Thr，优选为Ile、Val、Phe或Tyr;和或[0114]-在222位的Asn或Ser取代为Gin、Asp、Glu、Cys、Thr、Phe、Tyr、Trp、Arg、Lys或His，优选为Cys、Asp、Arg或Phe;和或[0115]-在235位的Lys取代为六作、财8、36!'、〇78、六1、\^1、116或1^11，优选为六作、!^8、〇乂8或Val;和或[0116]-在242位的Val取代为Arg、His或Lys，优选为His;和或[0117]-在261位的Arg或IIe取代为His、Lys、Asp、Glu、Ala、Val、Leu或Phe，优选为Asp、Phe、His或Val;和或[0118]-在315位的Leu取代为Ser、Thr或Cys，优选为Cys;和或[0119]-在342位的Thr取代为Ser或Cys，优选为Cys;和或[0120]-在349位的Gly取代为Ser、Thr或Cys，优选为Ser或Cys;和或[0121]-在350位的Gly取代为Ser、Thr、Cys、Tyr、Trp或Phe，优选为Ser、Tyr、Phe或Cys;和或[0122]-在356位的Tyr取代为八1、¥1、116、1^11、？1^或1'印，优选为¥1或?1^;和或[0123]-在438位的Pro取代为Arg、His或Lys，优选为His。[0124]更优选地，在突变的α2,6_转唾液酸酶中，与SEQIDNO.1的氨基酸序列至少90%相同的氨基酸序列是来自鳆发光杆菌JT-SHIZ-119的唾液酸基转移酶或其Λ2-15截短的变体，其氨基酸序列在以下氨基酸位置对应于氨基酸序列与SEQIDNo.1的比对来编号处突变：[0125]-在156位的Gly取代为Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Gln或Trp，优选为Ser、Cys或Tyr;和或[0126]-在161位的Gln取代为Ala、Val、Ile、Leu、Phe、Tyr、Trp或Gly，优选为Phe或Gly;和或[0127]-在180位的Glu取代为Asp、Asn、Gln，优选为Asp，和或[0128]-在186位的Ala取代为Val、lie、Leu、Met、Phe、Tyr、Trp、Ser、Cys或Thr，优选为Tyr、Cys或Leu;和或[0129]-在218位的Ala取代为Val、lie、Leu、Met、Phe、Tyr、Trp、Cys、Gly或Thr，优选为Ile、Val、Phe或Tyr;和或[0130]-在222位的Asn取代为Gin、Asp、Glu、Cys、Thr、Phe、Tyr、Trp、Arg、Lys或His，优选为Cys、Asp、Arg或Phe;和或[0131]-在235位的Lys取代为Arg、His、Ser、Thr、Cys、Ala、Val、IIe或Leu，优选为Arg、His、Cys或Val;和或[0132]-在242位的Val取代为Arg、His或Lys，优选为His;和或[0133]-在261位的Arg取代为His、Lys、Asp、Glu、Ala、Val、Leu或Phe，优选为Asp、Phe、His或Val;和或[0134]-在315位的Leu取代为Ser、Thr或Cys，优选为Cys;和或[0135]-在342位的Thr取代为Ser或Cys，优选为Cys;和或[0136]-在349位的Gly取代为Ser、Thr或Cys，优选为Ser或Cys;和或[0137]-在350位的Gly取代为Ser、Thr、Cys、Tyr、Trp或Phe，优选为Ser、Tyr、Phe或Cys;和或[0138]-在356位的Tyr取代为八1、¥1、1、1^11、？1^或1'印，优选为¥1或?1^;和或[0139]-在438位的Pro取代为Arg、His或Lys，优选为His。[0140]还优选地，在制备本发明的匪0混合物的过程中使用的突变的α2,6_转唾液酸酶中，与SEQIDNO.1基本上相同、特别是至少90%相同的氨基酸序列具有至少两个、优选至少三个在选自以下的氨基酸位置对应于氨基酸序列与SEQIDNo.1的比对来编号）的氨基酸位置处的突变：[0141]-156位取代为361'、1'111'、〇78、171'、六811、6111或1'印，优选为361'、〇78或丁乂1';[0142]-161位取代为Ala、Val、lie、Leu、Phe、Tyr、Trp或Gly，优选为Phe或Gly;[0143]-180位取代为Asp、Asn、Gln，优选为Asp;[0144]-186位取代为Val、lie、Leu、Met、Phe、Tyr、Trp、Ser、Cys或Thr，优选为Tyr、Cys或Leu;[0145]_218位取代为\^1、116、1^11、]\^七、？116、丁71'、1'印、〇78、617或1'111'，优选为116、\^1、Phe或Tyr;[0146]-222位取代为Gln、Asp、Glu、Cys、Thr、Phe、Tyr、Trp、Arg、Lys或His，优选为Cys、Asp、Arg或Phe;[0147]-235位取代为△坪、把8、361'、0}^、八13、\^1、116或1^11，优选为八坪、]^8、〇5^或\^1;[0148]-242位取代为Arg、His或Lys，优选为His;[0149]-261位取代为His、Lys、Asp、Glu、Ala、Val、Leu或Phe，优选为Asp、Phe、His或Val;[0150]-315位取代为Ser、Thr或Cys，优选为Cys;[0151]-342位取代为Ser或Cys，优选为Cys;[0152]-349位取代为Ser、Thr或Cys，优选为Ser或Cys;[0153]-350位取代为Ser、Thr、Cys、Tyr、Trp或Phe，优选为Ser、Tyr、Phe或Cys;[0154]-356位取代为413、¥31、116、1^11、？1^或1'印，优选为¥31或?116;和[0155]-438位取代为Arg、His或Lys，优选为His。[0156]与转唾液酸酶和或唾液酸基转移酶反应中上述公开的单点突变的酶相比，这些突变的〇2,6-转唾液酸酶的特征在于相对于LNnT的内部半乳糖基部分，针对末端半乳糖基部分的区域选择性甚至更加提高。[0157]根据优选的实施方式，在突变的α2,6-转唾液酸酶中，与SEQIDNo.1基本上相同、特别是至少90%相同的氨基酸序列具有至少两个、优选至少三个在选自如下的氨基酸位置对应于氨基酸序列与SEQIDNo.1的比对来编号）的氨基酸位置处的突变：[0158]-在156位的氨基酸取代为Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Gln或Trp，优选为Ser、Cys或Tyr；[0159]-在218位的氨基酸取代为Val、lie、Leu、Met、Phe、Tyr、Trp、Cys、Gly或Thr，优选为Ile、Val、Phe或Tyr;[0160]-在222位的氨基酸取代为Gln、Asp、Glu、Cys、Thr、Phe、Tyr、Trp、Arg、LysSHisJ;fc选为Cys、Asp、Arg或Phe;和[0161]-在349位的氨基酸取代为Ser、Thr或Cys，优选为Ser或Cys。[0162]根据更优选的实施方式，在突变的α2,6_转唾液酸酶中，与SEQIDNO.1的氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列优选为来自鳆发光杆菌JT-SHIZ-119的唾液酸基转移酶或其Δ2-15截短的变体、来自鳆发光杆菌JT-SHIZ-145的唾液酸基转移酶或其Δ2-15截短的变体、或者来自美人鱼发光杆菌JT0160的唾液酸基转移酶或其△2-15截短的变体的氨基酸序列，其包含至少两个、优选至少三个在选自以下位置对应于氨基酸序列与SEQIDNo.1的比对来编号）的氨基酸位置处的突变：[0163]-在156位的Gly取代为Ser、Thr、Cys、Tyr、AsruGln或Trp，优选为Ser、Cys或Tyr;[0164]-在218位的Ala或Ser取代为Val、lie、Leu、Met、Phe、Tyr、Trp、Cys、Gly或Thr，优选Slle、Val、PheSTyr;[0165]-在222位的Asn或Ser取代为Gin、Asp、Glu、Cys、Thr、Phe、Tyr、Trp、Arg、Lys或His，优选为Cys、Asp、Arg或Phe;和[0166]-在349位的Gly取代为Ser、Thr或Cys，优选为Ser或Cys。[0167]根据还更优选的实施方式，在突变的α2,6_转唾液酸酶中，与SEQIDNO.1的氨基酸序列基本上相同、特别是至少90%相同的氨基酸序列优选为来自鳆发光杆菌JT-SHIZ-119的唾液酸基转移酶或其△2-15截短的变体、或者来自鳆发光杆菌JT-SHIZ-145的唾液酸基转移酶或其A2-15截短的变体，该氨基酸序列包含至少两个、优选至少三个在选自以下位置对应于氨基酸序列与SEQIDNo.1的比对来编号）的氨基酸位置处的突变：[0168]-在156位的Gly取代为Ser、Thr、Cys、Tyr、AsruGln或Trp，优选为Ser、Cys或Tyr;[0169]-在218位的Ala取代为Val、lie、Leu、Met、Phe、Tyr、Trp、Cys、Gly或Thr，优选为Ile、Val、Phe或Tyr;[0170]-在222位的Asn或Ser取代为Gin、Asp、Glu、Cys、Thr、Phe、Tyr、Trp、Arg、Lys或His，优选为Cys、Asp、Arg或Phe;和[0171]-在349位的Gly取代为Ser、Thr或Cys，优选为Ser或Cys。[0172]根据甚至更优选的实施方式，在突变的α2,6_转唾液酸酶中，与SEQIDNO.1的氨基酸序列基本上相同、特别是至少90%相同的氨基酸序列优选为来自鳆发光杆菌JT-SHIZ-119的唾液酸基转移酶或其Δ2-15截短的变体，该氨基酸序列包含至少两个、优选至少三个在选自以下位置的氨基酸位置处的突变：[0173]-在156位的Gly取代为Ser、Thr、Cys、Tyr、AsruGln或Trp，优选为Ser、Cys或Tyr;[0174]-在218位的Ala取代为Val、lie、Leu、Met、Phe、Tyr、Trp、Cys、Gly或Thr，优选为Ile、Phe或Tyr;[0175]-在222位的Asn取代为Gin、Asp、Glu、Cys、Thr、Phe、Tyr、Trp、Arg、Lys或His，优选为Cys、Asp、Arg或Phe;和[0176]-在349位的Gly取代为Ser、Thr或Cys，优选为Ser或Cys。[0177]根据特别优选的实施方式，在突变的α2,6_转唾液酸酶中，与SEQIDNO.1的氨基酸序列基本上相同、特别是至少90%相同的氨基酸序列是来自鳆发光杆菌JT-SHIZ-119的唾液酸基转移酶或其Δ2-15截短的变体，该氨基酸序列包含下列突变:A218Y、N222R和G349S对应于氨基酸序列与SEQIDNo.l的比对来编号）。[0178]除区域选择性之外，重要的是α2,6_转唾液酸酶的转唾液酸酶活性大于其水解活性。在反应过程中，由于LSTc浓度的增加，在某个时间点，LSTc的水解可能变得显著，然后其降解成LNnT和唾液酸。为了制备本发明的HMO混合物，应该在出现显著的产物水解之前停止反应。这个时间点可以通过公知的酶动力学测量而容易地确定。[0179]用于制备本发明的HMO混合物的α2，6-转唾液酸酶优选选自缺乏水解活性或至少具有显著降低的水解活性、并具有如上所述的高度区域选择性的α2,6_转唾液酸酶。[0180]在进行本发明的方法时，6’-SL供体、LNnT受体、α2，6-转唾液酸酶、含水溶剂和温育缓冲液（例如IOOmMΚΗΡ04的具体相对浓度不是关键的。在这方面，该方法可以在室温例如15-50°C，优选20-37°C、ρΗ为6-8、优选为约6时，适当地进行15分钟至24小时。[0181]在一个优选的实施方式中，本发明的任何HMO混合物由经基因改造成表达如上所述的α2，6_转唾液酸酶的微生物制备。微生物基因改造用于重组制备生物活性分子的方法和酶分子的分子操作在本领域中是公知的，参见例如GreenMRSambrookJ:MolecularCloning:ALaboratoryManual，第四版，2012，CSHLPRESS。[0182]本发明的MO混合物的用途[0183]令人惊奇的是，包含6’-SL、LNnT和LSTc的HMO混合物是抗感染组合物，因此它们可以有利地用于治疗病毒和或细菌感染、特别是呼吸道的感染。[0184]因此，在一个实施方式中，本发明的抗感染组合物可以是药物组合物。药物组合物还可包含药学上可接受的载体，例如磷酸缓冲盐溶液、乙醇在水中的混合物、水和乳液如油水或水油乳液，以及各种润湿剂或赋形剂。本发明的药物组合物还可包含当施用于患者时不产生不良反应、过敏反应或其他不希望的反应的其他材料。载体和其它材料可以包括溶剂、分散剂、涂层、吸收促进剂、控释剂、和一种或多种惰性赋形剂，比如淀粉、多元醇、成粒剂、微晶纤维素、稀释剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂。如果需要，抗感染组合物的片剂剂量可以通过标准的水性或非水性技术进行包衣。[0185]在另一个实施方式中，本发明的抗感染组合物可以是营养组合物。例如，营养组合物可以配制为补液溶液、或老年人或免疫受损个体的膳食维持或补充剂。宏量营养素如可食用脂肪、碳水化合物和蛋白质也可以包括在这种营养组合物中。可食用脂肪包括例如椰子油、大豆油和单甘油酯和甘油二酯。碳水化合物包括例如葡萄糖、可食用乳糖和水解玉米淀粉。蛋白质包括例如大豆蛋白、乳清和脱脂乳。维生素和矿物质（例如钙、磷、钾、钠、氯、镁、锰、铁、铜、锌、硒、碘和维生素A、E、D、C和B复合物也可以包括在这种营养组合物中。[0186]本发明的抗感染组合物可以口服给药，例如，作为包含预定量的第一或第二混合物的片剂、胶囊或小丸剂，或作为包含预定浓度的第一混合物或第二混合物的粉末或颗粒，或包含预定浓度的第一或第二混合物的在水性或非水性液体中的凝胶、糊剂、溶液、混悬液、乳剂、糖衆、大丸剂、药糖剂或膏剂。口服给药的组合物可以包括粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、调味剂和保湿剂。口服给药的组合物如片剂可以任选地进行包衣，并且可以配制成对其中的第一或第二混合物提供持续、延迟或控制释放。[0187]本发明的抗感染组合物、有利地是药物组合物，还可以通过直肠栓剂、气溶胶管、鼻胃管或直接输注到胃肠道或胃中施用。[0188]本发明的抗感染药物组合物还可以另外包括治疗剂如抗病毒剂、抗生素、益生菌、止痛剂和抗炎剂。对于患者，这些组合物的合适剂量可以基于如患者的免疫状态、体重和年龄等因素以常规方式来确定。在一些情况下，剂量的浓度与人母乳中发现的6’-SULNnI^P或LSTc的浓度相似。所需量通常在每天约200mg至约20g的范围内，在某些实施方式中为每天约300mg至约15g、每天约400mg至约10g，在某些实施方式中为每天约500mg至约10g，在某些实施方式中为每天约Ig至约IOg。合适的剂量方案可以通过本领域技术人员已知的方法来确定。[0189]另一方面，本发明提供一种调节人、特别是非婴儿个体的微生物组以增加双歧杆菌丰度的方法。该方法包括向所述人施用6’-SULNnT和LSTc，有利地施用本发明的第一或第二混合物，更有利地施用第一混合物，如上所述。[0190]“非婴儿人”、“非婴儿个体”或“非婴儿”优选地是指3岁及以上的人。非婴儿人可以是儿童、青少年、成人或老人。[0191]又一方面，本发明提供一种预防或治疗人、特别是非婴儿个体的的病毒和或细菌感染、特别是消化道感染的方法。该方法包括向人施用6’-SL、LNnT和LSTc的混合物，有利地施用本发明的第一或第二混合物，更有利地施用第一混合物，如上所述。[0192]虽然已经参照优选实施方式描述本发明，但是应当理解，在本发明的范围内可以进行各种修改。[0193]在本说明书中，除非有明确的相反说明，当符合所述条件的两者中任一个或两个时，从操作者的意义上使用“或者或or”一词以还原真实意义，而不是操作者的仅需要符合条件中的一个的“异或（exclusiveor”。“包括（comprising”一词用于“包含including”的意义，而不是意指“由…组成”。以上承认的所有在先的教导并入本文以供参考。不应将本文承认的任何在先公开的文件视为认可或表示其教导在澳大利亚或其他地方在其公开日期为公知常识。[0194]实施例[0195]实施例1[0196][0197]测试由其信号肽（Δ2-15截短的鳆发光杆菌JT-SHIZ-119唾液酸基转移酶的突变体，突变的位置根据SEQIDNo.1。[0198]使用50mM的LNnT和50mM的6’-SL以及110体积的粗酶提取物，在30°C以100_200μ1规模在磷酸钾缓冲液（100mM，pH=6.0中进行测试。在下面给出的时间点取样20μ1。通过加入20μ1乙腈-甲酸铵（10mM，pH=4.04:1的混合物来终止反应。随后加入160μ1蒸馏水，再次混合样品，离心并用HPLC5μ1注射液分析。在40°C柱温箱温度下使用Kinetix2.6yHILIC100A-柱（150x4.6mm，使用81%乙腈和19%甲酸铵缓冲液（10mM，pH=4.0作为流动相，流速为2.5mlmin。在200nm处检测洗脱的底物和产物。[0199]对于所有计算，LNnT和各个单独的唾液酸化产物化合物A、B和C，参见方案1的峰面积根据它们各自的N-乙酰残基数进行如下归一化：[0200]LNnT的归一化峰面积=LNnT的峰面积[0201]化合物A的归一化峰面积=化合物A的12峰面积[0202]化合物B的归一化峰面积=化合物B的12峰面积[0203]化合物C的归一化峰面积=化合物C的13峰面积[0204]单个产物的浓度[mM]计算为假设LNnT和所有产物的浓度之和为50mM:[0206]LNnT至产物的总转化率计算为：[0207][0208]化合物ALSTc的产物纯度计算为：[0209][0211]根据数据可以估计，当转化率45%时，在上述酶促合成中形成的唯一产物是化合物ALSTc。因此，可以得到以下混合物乳糖与LSTc等摩尔）：[0212][0213]实施例2[0214]在该研究中招募总共20名男性和女性患者参加。经筛查访问和测试run-in期1-2周后，选择患者并随机分为两组，每组10名患者。对一组施用包含5克的LNnT、6’-SL和LSTc组合的治疗产品，且对一组施用安慰剂产品（2克葡萄糖），均施用8周。治疗产品和安慰剂在单位剂量容器中呈粉末形式。[0215]如果患者年满18周岁，则有资格参加。所有招募的患者都可以并愿意了解和遵守研究程序。如果有以下情况，则将患者排除：患者在筛查访问前一个月内已经参加了临床研究；患者在筛查测试中具有临床上与参加研究有关的异常结果;患者正患有严重的疾病，如恶性肿瘤、糖尿病、严重冠心病、肾脏疾病、神经系统疾病或严重的精神疾病或任何可能混淆研究结果的病症;在研究前使用高剂量的益生菌补充剂允许使用酸奶3个月；在研究前3个月内服用抗生素药物;在研究前2周内定期服用任何可能干扰症状评估的药物;和怀孕或泌乳。[0216]在筛查访问时，登记病史和伴随药物，并收集血液样本用于安全性分析。分发粪便样本试剂盒。要求患者将样本保存在冰箱中，直到下一次访问。[0217]在第二次访问时，检查资格标准，并且将合格的受试者随机分配到试验中的三组arms。收集粪便样本并分发用于新样本的装置。使患者熟悉互动互联网启用系统interactiveinternetenabledsystem，每天记录数据，并提供给治疗或对照产品。提醒受试者在研究过程中不要改变他们惯常的饮食。收集血液样本用于生物标志物研究。将粪便样本储存在_8〇°C直到分析。将粪便样本进行16SrRNA测序分析。[0218]该研究进行8周，患者每天服用安慰剂或治疗产品。患者被指示在早晨与早餐一起服用产品。通过互动互联网启用系统监控顺应性compliance。患者还使用系统记录：[0219]-Bristol奠便形态分类BristolStoolFormScaleBSFS信息，[0220]-症状信息如腹痛、腹部不适、腹部绞痛、腹胀和腹部饱胀感，[0221]-额外的胃肠症状评定量表GastrointestinalSymptomRatingScaleGSRS信息。[0222]该调查问卷包括覆盖五个方面腹痛、消化不良、反流、腹泻、便秘）的15项，并使用七级李克特量表（seven-gradedLikertscale。[0223]在研究结束时，每个患者都有医疗团队的退出访问。如前所述收集和分析粪便样本和血液样本。[0224]粪便分析表明，治疗患者的双歧杆菌的丰度增加。[0225]实施例3[0226]各自单独地安置十只5天龄的斯普拉-道来Sprague-Dawley大鼠以避免大鼠之间的污染并提供给经辐照的食物和水。将大鼠分为2组，每组5只大鼠：一个治疗组和一个对照组。[0227]将LNnT、6’-SL和LSTc的混合物以40mgml的总浓度加入到治疗组的饮用水中。对照组的水未改变第0天）。每天给予新鲜的水，并且所有大鼠都可以自由接近饮用水。以啮齿动物食物喂养大鼠，并每天给予新鲜的食物。[0228]在施用混合物两天后（第2天），通过口服强饲法用装入胶囊的肺炎链球菌S.pneumoniae菌株对两组大鼠进行感染。[0229]24小时后，使用盐溶液对大鼠进行鼻洗涤。回收溶液，并通过对琼脂板上的菌落计数来获得活细菌的数量。监测大鼠1周，然后将其安乐死第10天）。收集肺部。在第〇、3和10天获得新鲜的粪便丸。将样本立即冷冻并储存在_80°C。使用96孔PowerSoilDNA分离试剂盒Μ0-ΒΙ0提取DNA。在PCR期间每个板最少一个样本孔保持为空，以用作阴性对照。使用附带的Illumina适配器用正向引物S-D-Bact-0341-b-S-17和反向引物S-D-Bact-0785-a-A-21Klindworth等人，NucleicAcidsRes.41，el2013进行PCR。这些是革巴向V3-V4区域的通用的细菌16SrDNA引物。使用以下PCR程序:98°C进行30秒，25X98°C进行10秒，55°C进行20秒，72°C进行20秒），72°C进行5分钟。通过将产物在1%琼脂糖凝胶上运行来验证扩增。在使用NexteraIndexKitV2Illumina的嵌套PCR中加入条形码barcode，使用以下PCR程序:98°C进行30秒，8X98°C进行10秒，55°C进行20秒，72°C进行20秒），72°C进行5分钟。通过将产物在1%琼脂糖凝胶上运行来验证引物的附着。[0230]使用SequalPrepNormalizationPlateKit对来自嵌套PCR的产物进行归一化和合并。通过蒸发浓缩合并的文库，并使用QubitHighSensitivityAssayKitThermoFisherScientific在Qubit荧光计上测量合并的文库的DNA浓度。使用用于2X300bp配对末端测序的MiSeqReagentKitV3Illumina在MiSeq桌面测序仪上进行测序。使用64位版本的USEARCHEdgar，2013用于序列数据的生物信息学分析。在HMOLNnT、6’-SL和LSTc处理的大鼠中，与对照大鼠相比，肺部的肺炎链球菌定殖减少。类似地，与对照大鼠相比，在经处理的大鼠的鼻洗液中回收的存活的肺炎链球菌的量减少。

权利要求：1.一种人乳低聚糖HMO的混合物，其基本上由6’-ο-唾液酸基乳糖6’-SL、乳-N-新四糖LNnT和唾液酸基乳-N-四糖cLSTc组成。2.根据权利要求1所述的混合物，其中LSTc相对于（6’-SL+LNnT的摩尔比为至少1:18，优选为至少1:8，更优选为至少1:5，甚至更优选为至少1:3。3.根据权利要求1或2所述的混合物，其中6’-SL相对于LNnT的摩尔比为0.18-5.5，优选为0.3-3，更优选为约1。4.一种HMO的混合物，其基本上由6’-SULNnT、LSTc和乳糖组成。5.根据权利要求4所述的混合物，其中：-6’-SL+LNnT相对于LSTc的摩尔比为2-18,并且-乳糖相对于LSTc的摩尔比为约1。6.根据权利要求4或5所述的混合物，其中6’-SL与LSTc的摩尔比以及LNnT与LSTc的摩尔比中之一不大于4。7.根据权利要求4至6所述的混合物，其中6’-SL与LNnT的摩尔比为0.18-5.5。8.—种用于获得根据权利要求1-3中任一项所述的混合物的方法，其包括以下步骤:使6’-SL和LNnT在α2,6-转唾液酸酶的存在下进行反应以产生反应介质，然后从所述反应介质中除去乳糖和所述α2，6-转唾液酸酶。9.一种用于获得根据权利要求4-7所述的混合物的方法，其包括以下步骤:使6’-SL和LNnT在α2,6_转唾液酸酶的存在下进行反应以产生反应介质，然后从所述反应介质中除去所述α2，6-转唾液酸酶。10.根据权利要求9所述的方法，其包括以下步骤:使6’-SL和LNnT在α2，6-转唾液酸酶的存在下以1:3至3:1、优选1:2至2:1、更优选1:1的摩尔比进行反应，所述α2,6-转唾液酸酶对于6’-SL和LNnT的反应的转化率为至少20%、至多约55%，优选为至少30%，更优选为至少40%。11.根据权利要求10所述的方法，其包括以下步骤:使6’-SL和LNnT在α2，6-转唾液酸酶的存在下以1:1的摩尔比进行反应，所述α2，6-转唾液酸酶对于6’-SL和LNnT的反应的转化率为至少20%、至多约45%，优选为至少30%，更优选为至少40%。12.根据权利要求10所述的方法，其包括以下步骤:使6’-SL和LNnT在α2，6-转唾液酸酶的存在下以1:1的摩尔比进行反应，所述α2，6-转唾液酸酶对于6’-SL和LNnT的反应的转化率为30-45%。13.根据权利要求8至12中任一项所述的方法，其中所述α2,6-转唾液酸酶具有与SEQIDNo.1的氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列，并且其包含以下至少一种：-在156位的氨基酸选自Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Gln或Trp，优选Ser、Cys或Tyr;和或-在161位的氨基酸选自Ala、Val、lie、Leu、Phe、Tyr、Trp或Gly，优选Phe或Gly;和或-在180位的氨基酸选自Asp、Asn、Gln，优选Asp;和或-在186位的氨基酸选自Val、lie、Leu、Met、Phe、Tyr、Trp、Ser、Cys或Thr，优选Tyr、Cys或Leu;和或_在218位的氨基酸选自\%1、116、1^11、]^1:、？116、15^、1^、〇5^、617或1'111'，优选116、'\^1、Phe或Tyr;和或-在222位的氨基酸选自Gin、Asp、Glu、Cys、Thr、Phe、Tyr、Trp、Arg、Lys或His，优选Cys、Asp、Arg或Phe;和或-在235位的氨基酸选自Arg、His、Ser、Cys、Ala、Val、IIe或Leu，优选Arg、His、Cys或Val;和或-在242位的氨基酸选自Arg、His或Lys，优选His;和或-在261位的氨基酸选自His、Lys、Asp、Glu、Ala、VaULeu或Phe，优选Asp、Phe、His或Val;和或-在315位的氨基酸选自Ser、Thr或Cys，优选Cys;和或-在342位的氨基酸选自Ser或Cys，优选Cys;和或-在349位的氨基酸选自Ser、Thr或Cys，优选Ser或Cys;和或-在350位的氨基酸选自Ser、Thr、Cys、Tyr、Trp或Phe，优选Ser、Tyr、Phe或Cys;和或-在356位的氨基酸选自△1、¥1、116、1^11、？1^或1'印，优选¥1或?1^;和或-在438位的氨基酸选自Arg、His或Lys，优选His，其中所述位置通过使用比较算法将所述氨基酸序列与SEQIDNo.1进行比对来定义。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述与SEQIDNo.1的氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列是来自鳆发光杆菌P.leiognathiJT-SHIZ-119的唾液酸基转移酶的氨基酸序列或其在以下氨基酸位置突变的A2-15截短的变体：-在156位的Gly由Ser、Cys或Tyr取代;和或-在161位的Gln由Phe或Gly取代;和或-在180位的Glu由Asp取代，和或-在186位的Ala由Tyr、Cys或Leu取代;和或-在218位的Ala由Ile、Val、Phe或Tyr取代;和或-在222位的Asn由Cys、Asp、Arg或Phe取代;和或-在235位的Lys由Arg、His、Cys或Val取代;和或-在242位的Val由His取代;和或-在261位的Arg由Asp、Phe、His或Val取代;和或-在315位的Leu由Cys取代;和或-在342位的Thr由Cys取代;和或-在349位的Gly由Ser或Cys取代;和或-在350位的Gly由Ser、Tyr、Phe或Cys取代;和或-在356位的Tyr由Val或Phe取代;和或-在438位的Pro由His取代。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述α2，6-转唾液酸酶在156、218、222和349的至少两个氨基酸位置处具有突变，特别是在156、218、222和349的至少三个氨基酸位置处具有突变，更具体地：-在156位的Gly由Ser、Cys或Tyr取代;和或-在218位的Ala由Ile、Val、Phe或Tyr取代;和或-在222位的Asn由Cys、Asp、Arg或Phe取代;和或-在349位的Gly由Ser或Cys取代。16.—种用于治疗细菌感染的抗感染组合物，其包含6’-SULNnT和LSTc，优选基本上由6’-SULNnT和LSTc组成或基本上由6’-SL、LNnT、LSTc和乳糖组成，更优选基本上由6’-SULNnT和LSTc组成。17.—种调节人微生物组以增加双歧杆菌Bifidobacterium丰度的方法，所述方法包括向人施用6’-SULNnT和LSTc，优选基本上由6’-SULNnT和LSTc组成的混合物或基本上由6’-SL、LNnT、LSTc和乳糖组成的混合物，更优选基本上由6’-SULNnT和LSTc组成的混合物。18.—种预防或治疗人的病毒和或细菌感染、特别是呼吸道感染的方法，所述方法包括向人施用6’-SULNnT和LSTc，优选基本上由6’-SULNnT和LSTc组成的混合物或基本上由6’-SL、LNnT、LSTc和乳糖组成的混合物，更优选基本上由6’-SULNnT和LSTc组成的混合物。

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