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申请/专利权人：中国石油化工股份有限公司;中国石油化工股份有限公司石油化工科学研究院

摘要：本公开提供了编码Hfq蛋白的核酸在制备产金合欢烯的工程菌中的用途。本公开还提供了一种制备产金合欢烯的工程菌的方法。本公开还提供了上述方法制备得到的工程菌。本公开还提供了一种利用纤维素制备金合欢烯的方法，其中，该方法包括如下步骤：1将含有纤维素的固态原料进行水解处理，得到含有单糖的水解产物；2在包括所述含有单糖的水解产物的液态发酵原料中接种如上所述的工程菌，并进行发酵培养，得到培养后的物料。因此，本公开通过上述技术方案，显著地提高了利用纤维素水解产物发酵生产金合欢烯的产率。

主权项：1.编码Hfq蛋白的核酸在制备产金合欢烯的工程菌中的用途，其中，所述Hfq蛋白的氨基酸序列为SEQIDNO.1所示的氨基酸序列；所述工程菌为大肠杆菌。

全文数据：编码Hfq蛋白的核酸的用途以及利用纤维素制备金合欢烯的方法技术领域本公开涉及生物工程领域，具体地，涉及编码Hfq蛋白的核酸在制备产金合欢烯的工程菌中的用途、一种制备产金合欢烯的工程菌的方法、该方法制备得到的工程菌以及一种利用纤维素制备金合欢烯的方法。背景技术金合欢烯可加氢转化为金合欢烷，是一种可再生、可与石化柴油和航天燃料混合使用的燃料。金合欢烯具有不含硫、高十六烷值、低温性能和低GHG排放的优点，是一种应用广泛且效果理想的生物基化学品。例如，CN101553558A描述了在大肠杆菌中利用含有葡萄糖的培养基通过MEV途径生成金合欢烯。通过微生物法生产金合欢烯需要解决的一个重要问题是葡萄糖的来源问题。纤维素是自然界中分布最广、含量最多的一种多糖，占植物界碳含量的50％以上，是一种重要的葡萄糖来源。具体地，纤维素是由D-葡萄糖通过β-1,4-糖苷键联结而成的大分子多糖，不溶于水及一般有机溶剂，是植物细胞壁的主要成分。例如，棉花的纤维素含量接近100％。纤维素通常与半纤维素、果胶和木质素结合在一起。例如一般木材中，纤维素占40～50％，还有10～30％的半纤维素和20～30％的木质素。纤维素只有在降解为葡萄糖以后，才能被微生物工程菌作为碳源利用。在实际生产中，作为纤维素的来源的原材料主要包括秸秆、树皮、木屑、玉米芯、米糠和麦麸等，这些原材料中纤维素往往形成一种具有高度结晶区的超分子稳定结构，同时其周围紧密镶嵌着半纤维素和木质素，从而形成复杂稳定的结构，其使得纤维素很难直接被微生物直接利用。目前，通常对作为纤维素的来源的原材料先进行预处理和酶解，在将得到的含有单糖的产物送入发酵过程。例如，已有的预处理方法主要有稀酸处理、热液处理、蒸汽爆破、有机溶剂处理、低温氨浸处理、碱液处理、碱性过氧化氢处理和生物法处理等。又例如，已有的酶解包括纤维素酶和或β-葡萄糖苷酶的酶解。然而，在研究过程中发现，纤维素水解产生含有单糖的产物如果用于金合欢烯的发酵生产，存在着产率低下的缺陷。发明内容本公开的目的之一是提高利用纤维素水解产物发酵生产金合欢烯的产率。为了实现上述目的，一方面，本公开提供了编码Hfq蛋白的核酸在制备产金合欢烯的工程菌中的用途，其中，所述Hfq蛋白为如下a或b的蛋白：a由SEQIDNO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白，b在a中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有Hfq蛋白活性的由a衍生的蛋白。另一方面，本公开还提供了一种制备产金合欢烯的工程菌的方法，其中，该方法包括：通过对工程菌宿主菌进行重组质粒的转入或染色体整合敲入的改造，使得改造后的工程菌宿主菌能够具有异戊烯焦磷酸异构酶IDI、金合欢烯焦磷酸合成酶ispA和金合欢烯合成酶FG的表达，并且能够具有组成甲羟戊酸MVA途径的多种酶或者组成脱氧木酮糖-5-磷酸MEP途径的多种酶的表达，以及能够具有Hfq蛋白的过表达；所述Hfq蛋白为如下a或b的蛋白：a由SEQIDNO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白，b在a中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有Hfq蛋白活性的由a衍生的蛋白。另一方面，本公开还提供了上述方法制备得到的工程菌。再一方面，本公开还提供了一种利用纤维素制备金合欢烯的方法，其中，该方法包括如下步骤：1将含有纤维素的固态原料进行水解处理，得到含有单糖的水解产物；2在包括所述含有单糖的水解产物的液态发酵原料中接种如上所述的工程菌，并进行发酵培养，得到培养后的物料。利用纤维素水解产物发酵生产金合欢烯存在着产率低下的原因可能在于纤维素水解产物中存在抑制发酵的因子，Hfq蛋白的过表达能显著地提高工程菌的抗逆性。因此，本公开通过上述技术方案，显著地提高了利用纤维素水解产物发酵生产金合欢烯的产率。本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。具体实施方式以下对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。一方面，本公开提供了编码Hfq蛋白的核酸在制备产金合欢烯的工程菌中的用途，其中，所述Hfq蛋白为如下a或b的蛋白：a由SEQIDNO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白，b在a中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有Hfq蛋白活性的由a衍生的蛋白。其中，Hfq蛋白活性是指Hfq蛋白的RNA分子伴侣活性；Hfq蛋白活性的检测方法可以为已知方法。其中，在a中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加的氨基酸数目可以为1-100个中的任意个数。其中，所述编码Hfq蛋白的核酸根据密码子的简并性可以为多个，可以在所编码的Hfq蛋白的氨基酸序列不变的情况下，根据密码子偏性对编码Hfq蛋白的核酸的核苷酸序列进行优化。可选地，其中，所述编码Hfq蛋白的核酸为由SEQIDNO.2所示的核苷酸序列组成的核酸。可选地，其中，所述产金合欢烯的工程菌为能够利用纤维素水解产物进行发酵产生金合欢烯的工程菌。可选地，其中，所述工程菌为大肠杆菌。可选地，其中，所述能够利用纤维素水解产物进行发酵产生金合欢烯的工程菌中能够具有异戊烯焦磷酸异构酶IDI、金合欢烯焦磷酸合成酶ispA和金合欢烯合成酶FG的表达，并且能够具有组成甲羟戊酸MVA途径的多种酶或者组成脱氧木酮糖-5-磷酸MEP途径的多种酶的表达。可选地，所述组成甲羟戊酸MVA途径的多种酶包括乙酰乙酰基CoA硫解酶、HMG-CoA合酶、HMG-CoA还原酶、甲羟戊酸激酶E12、磷酸甲羟戊酸激酶E8和甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶MVD1；所述乙酰乙酰基CoA硫解酶为atoB酶和或MvaE酶；所述HMG-CoA合酶为HMGS酶和或MvaS酶，所述HMG-CoA还原酶为HMGR酶和或MvaE酶。可选地，所述组成脱氧木酮糖-5-磷酸MEP途径的多种酶包括1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶DXS、1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶IspC、4-二磷酸胞苷-2C-甲基-D-赤藓糖醇合成酶IspD、4-二磷酸胞苷-2C-甲基-D-赤藓糖醇合成酶IspE、2C-甲基-D-赤藓糖-2,4-环二磷酸合成酶IspF、1-羟基-2-甲基-2-E-丁烯基4-二磷酸合成酶IspG和异戊烯基二甲基烯丙基二磷酸合成酶ispH。其中，本公开中所涉及到的各种酶的物种来源、氨基酸序列和核苷酸编码序列可以为已知的选择。例如，异戊烯焦磷酸异构酶IDI是指编号为EC5.3.3.2的酶，其来源及序列可以为已知的物种来源和序列包括人工序列。表1中给出了本公开中所涉及到的各种酶的参考信息，但本公开中所涉及到的各种酶的选取和使用并不局限于表1中的信息。表1另一方面，本公开提供了一种制备产金合欢烯的工程菌的方法，其中，该方法包括：通过对工程菌宿主菌进行重组质粒的转入或染色体整合敲入的改造，使得改造后的工程菌宿主菌能够具有异戊烯焦磷酸异构酶IDI、金合欢烯焦磷酸合成酶ispA和金合欢烯合成酶FG的表达，并且能够具有组成甲羟戊酸MVA途径的多种酶或者组成脱氧木酮糖-5-磷酸MEP途径的多种酶的表达，以及能够具有Hfq蛋白的过表达；所述Hfq蛋白为如下a或b的蛋白：a由SEQIDNO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白，b在a中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有Hfq蛋白活性的由a衍生的蛋白。其中，在一种优选实施方式中，通过对工程菌宿主菌进行重组质粒的转入或染色体整合敲入的改造，使得改造后的工程菌宿主菌能够具有柠檬酸裂解酶ACL和或乙酸激酶ack的过表达。在该优选实施方式中，柠檬酸裂解酶和乙酸激酶能够使得作为缓冲液成分的柠檬酸和乙酸被发酵的工程菌利用，从而进一步提高金合欢烯的产率。可选地，其中，所述工程菌为大肠杆菌；所述组成甲羟戊酸MVA途径的多种酶包括乙酰乙酰基CoA硫解酶、HMG-CoA合酶、HMG-CoA还原酶、甲羟戊酸激酶E12、磷酸甲羟戊酸激酶E8和甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶MVD1；所述乙酰乙酰基CoA硫解酶为atoB酶和或MvaE酶；所述HMG-CoA合酶为HMGS酶和或MvaS酶，所述HMG-CoA还原酶为HMGR酶和或MvaE酶。可选地，所述组成脱氧木酮糖-5-磷酸MEP途径的多种酶包括1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶DXS、1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶IspC、4-二磷酸胞苷-2C-甲基-D-赤藓糖醇合成酶IspD、4-二磷酸胞苷-2C-甲基-D-赤藓糖醇合成酶IspE、2C-甲基-D-赤藓糖-2,4-环二磷酸合成酶IspF、1-羟基-2-甲基-2-E-丁烯基4-二磷酸合成酶IspG和异戊烯基二甲基烯丙基二磷酸合成酶ispH。另一方面，本公开还提供了如上所述的方法制备得到的工程菌。另一方面，本公开还提供了一种利用纤维素制备金合欢烯的方法，其中，该方法包括如下步骤：1将含有纤维素的固态原料进行水解处理，得到含有单糖的水解产物；2在包括所述含有单糖的水解产物的液态发酵原料中接种如上所述的工程菌，并进行发酵培养，得到培养后的物料。可选地，其中，所述含有纤维素的原料包括秸秆、树皮、木屑、玉米芯、米糠和麦麸中的至少一种。可选地，其中，将含有纤维素的原料进行水解处理的步骤包括：S1、将含有纤维素的固态原料先后进行酸预处理和碱预处理，或者先后进行碱预处理和酸预处理，得到预处理后的固态物料；S2、将所述预处理后的固态物料进行酶促水解。可选地，其中，所述酸预处理为甲酸处理和或稀硫酸处理；所述甲酸处理的条件包括：温度为40～100℃，时间为1～10小时，相对每千克预处理的固体物料，甲酸溶液的体积为5～50升，所述甲酸溶液含有70～95wt％的甲酸和0～2wt％的HCl；所述稀硫酸处理的条件包括：温度为80～150℃，时间为5分钟～2小时，相对每千克预处理的固体物料，稀硫酸溶液的体积为5～50升，所述稀硫酸溶液含有0.5～10wt％的稀硫酸。可选地，其中，所述碱预处理为氨水处理和或氢氧化钠处理；所述氨水处理的条件包括：温度为40～80℃，时间为2～24小时，相对每千克预处理的固体物料，氨水的体积为2～20升，所述氨水含有10-25wt％的NH3；所述氢氧化钠处理的条件包括：温度为60～120℃，时间为1～12小时，相对每千克预处理的固体物料，氢氧化钠水溶液的体积为5～50升，所述氢氧化钠水溶液含有0.5～10wt％的氢氧化钠。可选地，其中，所述酶促水解的条件包括：温度30～70℃，时间3～72h，pH为4.0～6.0，每千克预处理后的固态物料，缓冲液的体积为5～100升，酶促水解所用的缓冲液含有0.01～1molL柠檬酸缓冲液和或0.01～1molL的乙酸缓冲液，酶促水解所用的酶为纤维素酶和或β-葡萄糖苷酶，所述纤维素酶加酶量为每克预处理后的固态物料10～500U，所述β-葡萄糖苷酶加酶量为每克预处理后的固态物料10～250U。可选地，其中，发酵培养的条件包括：温度为16～35℃，时间为3～120h，相对每升所述液态发酵原料，萃取剂的用量为50～1000mL，所述工程菌的接种量为10～300×107个；所述的萃取剂选自正己烷、正癸烷、十二烷或煤油；每升所述液态发酵原料中，以单糖的量计算，所述含有单糖的水解产物的含量为0.01～0.9千克。以下通过实施例进一步详细说明本发明：实施例1本实施例用于说明纤维素酶解液的制备。称取粒径为20～80目的玉米秸秆100g，加入1.5L甲酸溶液含有88wt％的甲酸和1wt％的HCl置于处理罐中。在65℃恒温水浴中反应3h后将反应浆液固液分离。对固体组分再进行氨水处理，处理条件为：氨水浓度15wt％、每千克固体组分所用的氨水的体积为8升、处理温度60℃和反应时间16h。反应结束后将物料固液分离，固体组分用蒸馏水洗涤至pH6～7，烘干，得到预处理后的固态物料。将所述预处理后的固态物料进行酶促水解，酶解条件包括：温度为50℃、每千克预处理后的固态物料所用缓冲液的体积为20升、缓冲液为pH为4.8的柠檬酸缓冲液0.15molL、酶促水解所用的酶为纤维素酶和β-葡萄糖苷酶，所述纤维素酶加酶量为每克预处理后的固态物料30U，所述β-葡萄糖苷酶加酶量为每克预处理后的固态物料60U。酶解24h后将反应浆液取出，在沸水浴中灭酶10min后进行抽滤。抽滤所得液体组分利用HPLC分析检测，所得纤维素酶解液葡萄糖浓度为38.2gL。实施例2本实施例用于说明质粒的序列结构。本实施例中用到的可商购载体包括pBAD33载体、pBBR1MCS-4载体和pet-28a载体。按照上述载体的使用说明书采用PCR克隆、全基因合成、限制性内切酶酶切和连接等分子生物学操作，首先构建1套MEP代谢路径的质粒，具体包括pDCDE质粒、pFGHII质粒和pFG质粒，接着构建1套MVA代谢路径的质粒，具体包括pMevT质粒、pMBIS质粒和pFG质粒，再构建1个用于替换pFG质粒且插入有Hfq基因的质粒，即pFGH质粒。上述质粒的序列信息具体如表2所示。表2实施例3本实施例用于说明工程菌株的构建过程。实验组工程菌株F1的构建：选用大肠杆菌BL21为宿主细胞，通过CaCl2转化法转入质粒pDCDE、pFGHII和pFGH。该菌株通过可通过MEP代谢路径合成金合欢烯，同时具有Hfq蛋白的过表达。在抗生素抗性筛选平板上，选取该菌株的3个克隆，分别为F1-1、F1-2和F1-3。实验组工程菌株F2的构建：选用大肠杆菌BL21为宿主细胞，通过CaCl2转化法转入质粒pMevT、pMBIS和pFGH。该菌株通过可通过MVA代谢路径合成金合欢烯，同时具有Hfq蛋白的过表达。在抗生素抗性筛选平板上，选取该菌株的3个克隆，分别为F2-1、F2-2和F2-3。对照组工程菌株DF1的构建：选用大肠杆菌BL21为宿主细胞，通过CaCl2转化法转入质粒pDCDE、pFGHII和pFG。该菌株通过可通过MEP代谢路径合成金合欢烯，但没有Hfq蛋白的过表达。在抗生素抗性筛选平板上，选取该菌株的3个克隆，分别为DF1-1、DF1-2和DF1-3。对照组工程菌株DF2的构建：选用大肠杆菌BL21为宿主细胞，通过CaCl2转化法转入质粒pMevT、pMBIS和pFG。该菌株通过可通过MVA代谢路径合成金合欢烯，但没有Hfq蛋白的过表达。在抗生素抗性筛选平板上，选取该菌株的3个克隆，分别为DF1-1、DF1-2和DF1-3。实施例4本实施例用于说明利用纤维素制备金合欢烯的方法。将实施例1得到的纤维素酶解液作为含有单糖的水解产物，用于制备液态发酵原料。每升所述液态发酵原料含有100mL实施例1得到的纤维素酶解液以及10g蛋白胨、5g酵母膏、10gNaCl和余量的水。液态发酵原料灭菌后待用。在上述液态发酵原料中添加抗生素氯霉素、卡那霉素和氨苄青霉素，终浓度为30mgL，然后分别接种实施例3得到的12个克隆，接种密度为200×107个L。在37℃下培养至OD600在0.6～08之间，向发酵液中添加终浓度为200mgL的IPTG、终浓度为1gL的L-阿拉伯糖和20mL正癸烷，在30℃下进行诱导表达以发酵合成金合欢烯。诱导24h后取1mL发酵液进行细胞密度和金合欢烯浓度的检测。结果如表3所示。表3根据表3的数据可见，就发酵产物中的金合欢烯含量而言，实验组工程菌株F1的3个克隆F1-1、F1-2和F1-3均显著高于对照组工程菌株DF1的3个克隆DF1-1、DF1-2和DF1-3，而实验组工程菌株F2的3个克隆F2-1、F2-2和F2-3均显著高于对照组工程菌株DF2的3个克隆DF2-1、DF2-2和DF2-3。由此可见，Hfq蛋白的高表达能够显著地提高利用纤维素水解产物发酵生产金合欢烯的产率。以上详细描述了本公开的优选实施方式，但是，本公开并不限于上述实施方式中的具体细节，在本公开的技术构思范围内，可以对本公开的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本公开的保护范围。另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本公开对各种可能的组合方式不再另行说明。此外，本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本公开的思想，其同样应当视为本公开所公开的内容。序列表中国石油化工股份有限公司中国石油化工股份有限公司石油化工科学研究院编码Hfq蛋白的核酸的用途以及利用纤维素制备金合欢烯的方法7819RIPP8SIPOSequenceListing1.01102PRT大肠杆菌Escherichiacoli1MetAlaLysGlyGlnSerLeuGlnAspProPheLeuAsnAlaLeuArg151015ArgGluArgValProValSerIleTyrLeuValAsnGlyIleLysLeu202530GlnGlyGlnIleGluSerPheAspGlnPheValIleLeuLeuLysAsn354045ThrValSerGlnMetValTyrLysHisAlaIleSerThrValValPro505560SerArgProValSerHisHisSerAsnAsnAlaGlyGlyGlyThrSer65707580SerAsnTyrHisHisGlySerSerAlaGlnAsnThrSerAlaGlnGln859095AspSerGluGluThrGlu1002309DNA大肠杆菌Escherichiacoli2atggctaaggggcaatctttacaagatccgttcctgaacgcactgcgtcgggaacgtgtt60ccagtttctatttatttggtgaatggtattaagctgcaagggcaaatcgagtcttttgat120cagttcgtgatcctgttgaaaaacacggtcagccagatggtttacaagcacgcgatttct180actgttgtcccgtctcgcccggtttctcatcacagtaacaacgccggtggcggtaccagc240agtaactaccatcatggtagcagcgcgcagaatacttccgcgcaacaggacagcgaagaa300accgaataa30939971DNA人工序列ArtificialSequence3atcgatgcataatgtgcctgtcaaatggacgaagcagggattctgcaaaccctatgctac60tccgtcaagccgtcaattgtctgattcgttaccaattatgacaacttgacggctacatca120ttcactttttcttcacaaccggcacggaactcgctcgggctggccccggtgcatttttta180aatacccgcgagaaatagagttgatcgtcaaaaccaacattgcgaccgacggtggcgata240ggcatccgggtggtgctcaaaagcagcttcgcctggctgatacgttggtcctcgcgccag300cttaagacgctaatccctaactgctggcggaaaagatgtgacagacgcgacggcgacaag360caaacatgctgtgcgacgctggcgatatcaaaattgctgtctgccaggtgatcgctgatg420tactgacaagcctcgcgtacccgattatccatcggtggatggagcgactcgttaatcgct480tccatgcgccgcagtaacaattgctcaagcagatttatcgccagcagctccgaatagcgc540ccttccccttgcccggcgttaatgatttgcccaaacaggtcgctgaaatgcggctggtgc600gcttcatccgggcgaaagaaccccgtattggcaaatattgacggccagttaagccattca660tgccagtaggcgcgcggacgaaagtaaacccactggtgataccattcgcgagcctccgga720tgacgaccgtagtgatgaatctctcctggcgggaacagcaaaatatcacccggtcggcaa780acaaattctcgtccctgatttttcaccaccccctgaccgcgaatggtgagattgagaata840taacctttcattcccagcggtcggtcgataaaaaaatcgagataaccgttggcctcaatc900ggcgttaaacccgccaccagatgggcattaaacgagtatcccggcagcaggggatcattt960tgcgcttcagccatacttttcatactcccgccattcagagaagaaaccaattgtccatat1020tgcatcagacattgccgtcactgcgtcttttactggctcttctcgctaaccaaaccggta1080accccgcttattaaaagcattctgtaacaaagcgggaccaaagccatgacaaaaacgcgt1140aacaaaagtgtctataatcacggcagaaaagtccacattgattatttgcacggcgtcaca1200ctttgctatgccatagcatttttatccataagattagcggatcctacctgacgcttttta1260tcgcaactctctactgtttctccatacccgtttttttgggctagcaggaggttaattgga1320tgagttttgatattgccaaatacccgaccctggcactggtcgactccacccaggagttac1380gactgttgccgaaagagagtttaccgaaactctgcgacgaactgcgccgctatttactcg1440acagcgtgagccgttccagcgggcacttcgcctccgggctgggcacggtcgaactgaccg1500tggcgctgcactatgtctacaacaccccgtttgaccaattgatttgggatgtggggcatc1560aggcttatccgcataaaattttgaccggacgccgcgacaaaatcggcaccatccgtcaga1620aaggcggtctgcacccgttcccgtggcgcggcgaaagcgaatatgacgtattaagcgtcg1680ggcattcatcaacctccatcagtgccggaattggtattgcggttgctgccgaaaaagaag1740gcaaaaatcgccgcaccgtctgtgtcattggcgatggcgcgattaccgcaggcatggcgt1800ttgaagcgatgaatcacgcgggcgatatccgtcctgatatgctggtgattctcaacgaca1860atgaaatgtcgatttccgaaaatgtcggcgcgctcaacaaccatctggcacagctgcttt1920ccggtaagctttactcttcactgcgcgaaggcgggaaaaaagttttctctggcgtgccgc1980caattaaagagctgctcaaacgcaccgaagaacatattaaaggcatggtagtgcctggca2040cgttgtttgaagagctgggctttaactacatcggcccggtggacggtcacgatgtgctgg2100ggcttatcaccacgctaaagaacatgcgcgacctgaaaggcccgcagttcctgcatatca2160tgaccaaaaaaggtcgtggttatgaaccggcagaaaaagacccgatcactttccacgccg2220tgcctaaatttgatccctccagcggttgtttgccgaaaagtagcggcggtttgccgagct2280attcaaaaatctttggcgactggttgtgcgaaacggcag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权利要求：1.编码Hfq蛋白的核酸在制备产金合欢烯的工程菌中的用途，其中，所述Hfq蛋白为如下a或b的蛋白：a由SEQIDNO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白，b在a中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有Hfq蛋白活性的由a衍生的蛋白。2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述编码Hfq蛋白的核酸为由SEQIDNO.2所示的核苷酸序列组成的核酸；所述产金合欢烯的工程菌为能够利用纤维素水解产物进行发酵产生金合欢烯的工程菌。3.根据权利要求2所述的用途，其中，所述工程菌为大肠杆菌；所述能够利用纤维素水解产物进行发酵产生金合欢烯的工程菌中能够具有异戊烯焦磷酸异构酶、金合欢烯焦磷酸合成酶和金合欢烯合成酶的表达，并且能够具有组成甲羟戊酸途径的多种酶或者组成脱氧木酮糖-5-磷酸途径的多种酶的表达；所述组成甲羟戊酸途径的多种酶包括乙酰乙酰基CoA硫解酶、HMG-CoA合酶、HMG-CoA还原酶、甲羟戊酸激酶、磷酸甲羟戊酸激酶和甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶；所述乙酰乙酰基CoA硫解酶为atoB酶和或MvaE酶；所述HMG-CoA合酶为HMGS酶和或MvaS酶，所述HMG-CoA还原酶为HMGR酶和或MvaE酶；所述组成脱氧木酮糖-5-磷酸途径的多种酶包括1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶、1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶、4-二磷酸胞苷-2C-甲基-D-赤藓糖醇合成酶、4-二磷酸胞苷-2C-甲基-D-赤藓糖醇合成酶、2C-甲基-D-赤藓糖-2,4-环二磷酸合成酶、1-羟基-2-甲基-2-E-丁烯基4-二磷酸合成酶和异戊烯基二甲基烯丙基二磷酸合成酶。4.一种制备产金合欢烯的工程菌的方法，其特征在于，该方法包括：通过对工程菌宿主菌进行重组质粒的转入或染色体整合敲入的改造，使得改造后的工程菌宿主菌能够具有异戊烯焦磷酸异构酶、金合欢烯焦磷酸合成酶和金合欢烯合成酶的表达，并且能够具有组成甲羟戊酸途径的多种酶或者组成脱氧木酮糖-5-磷酸途径的多种酶的表达，以及能够具有Hfq蛋白的过表达；所述Hfq蛋白为如下a或b的蛋白：a由SEQIDNO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白，b在a中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有Hfq蛋白活性的由a衍生的蛋白。5.根据权利要求4所述的方法，其中，通过对工程菌宿主菌进行重组质粒的转入或染色体整合敲入的改造，使得改造后的工程菌宿主菌能够具有柠檬酸裂解酶和或乙酸激酶的过表达。6.根据权利要求4或5所述的方法，其中，所述工程菌为大肠杆菌；所述组成甲羟戊酸途径的多种酶包括乙酰乙酰基CoA硫解酶、HMG-CoA合酶、HMG-CoA还原酶、甲羟戊酸激酶、磷酸甲羟戊酸激酶和甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶；所述乙酰乙酰基CoA硫解酶为atoB酶和或MvaE酶；所述HMG-CoA合酶为HMGS酶和或MvaS酶，所述HMG-CoA还原酶为HMGR酶和或MvaE酶；所述组成脱氧木酮糖-5-磷酸途径的多种酶包括1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶、1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶、4-二磷酸胞苷-2C-甲基-D-赤藓糖醇合成酶、4-二磷酸胞苷-2C-甲基-D-赤藓糖醇合成酶、2C-甲基-D-赤藓糖-2,4-环二磷酸合成酶、1-羟基-2-甲基-2-E-丁烯基4-二磷酸合成酶和异戊烯基二甲基烯丙基二磷酸合成酶。7.权利要求4-6中任意一项所述的方法制备得到的工程菌。8.一种利用纤维素制备金合欢烯的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：1将含有纤维素的固态原料进行水解处理，得到含有单糖的水解产物；2在包括所述含有单糖的水解产物的液态发酵原料中接种权利要求7所述的工程菌，并进行发酵培养，得到培养后的物料。9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述含有纤维素的原料包括秸秆、树皮、木屑、玉米芯、米糠和麦麸中的至少一种；将含有纤维素的原料进行水解处理的步骤包括：S1、将含有纤维素的固态原料先后进行酸预处理和碱预处理，或者先后进行碱预处理和酸预处理，；S2、将所述预处理后的固态物料进行酶促水解；所述酸预处理为甲酸处理和或稀硫酸处理；所述甲酸处理的条件包括：温度为40～100℃，时间为1～10小时，相对每千克预处理的固体物料，甲酸溶液的体积为5～50升，所述甲酸溶液含有70～95wt％的甲酸和0～2wt％的HCl；所述稀硫酸处理的条件包括：温度为80～150℃，时间为5分钟～2小时，相对每千克预处理的固体物料，稀硫酸溶液的体积为5～50升，所述稀硫酸溶液含有0.5～10wt％的稀硫酸；所述碱预处理为氨水处理和或氢氧化钠处理；所述氨水处理的条件包括：温度为40～80℃，时间为2～24小时，相对每千克预处理的固体物料，氨水的体积为2～20升，所述氨水含有10～25wt％的NH3；所述氢氧化钠处理的条件包括：温度为60～120℃，时间为1～12小时，相对每千克预处理的固体物料，氢氧化钠水溶液的体积为5～50升，所述氢氧化钠水溶液含有0.5～10wt％的氢氧化钠；所述酶促水解的条件包括：温度30～70℃，时间3～72h，pH为4.0～6.0，每千克预处理后的固态物料，缓冲液的体积为5～100升，酶促水解所用的缓冲液含有0.01～1molL柠檬酸缓冲液和或0.01～1molL的乙酸缓冲液，酶促水解所用的酶为纤维素酶和或β-葡萄糖苷酶，所述纤维素酶加酶量为每克预处理后的固态物料10～500U，所述β-葡萄糖苷酶加酶量为每克预处理后的固态物料10～250U。10.根据权利要求8或9所述的方法，其中，发酵培养的条件包括：温度为16～35℃，时间为3～120h，相对每升所述液态发酵原料，萃取剂的用量为50～1000mL，所述工程菌的接种量为10～300×107个；所述的萃取剂选自正己烷、正癸烷、十二烷或煤油；每升所述液态发酵原料中，以单糖的量计算，所述含有单糖的水解产物的含量为0.01～0.9千克。

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