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申请/专利权人：陕西师范大学
摘要：本发明公开了一种CRISPRCas9介导的附加内源RBS的微生物次级代谢产物强化启动系统，属于基因工程技术领域。本发明基于CRISPRCas9基因打靶系统实现了内源核糖体结合位点和外源启动子的联合，构建了附加lRBS的微生物次级代谢产物强化启动系统；同时联合孢子种间结合转移，提高了阳性突变株得率，从而显著提高了微生物次级代谢产物的产量。
主权项：1.含有dRBS的微生物次级代谢产物强化启动系统在提高稀有放线菌Nonomuraea的次级代谢产物中ecumicin的产量中的应用；其特征在于，所述含有dRBS的微生物次级代谢产物强化启动系统由如下方法构建而成：1利用信息学手段来确定lRBS位点，在mRNA的起始密码子上游8-13核苷酸处，存在一段由4-9个核苷酸组成的共有序列AGGAGG；2利用CasOT软件在合成起始基因的lRBS位点上游附近寻找目的打靶的特异性20bpsg-RNA序列并体外合成；3通过BaeⅠ限制酶酶切位点将目标基因的特异性sg-RNA序列克隆进入CRISPRCas9基因编辑载体中；所述特异性sg-RNA序列如SEQIDNO.3、SEQIDNO.4所示；4通过PCR分别扩增获得打靶基因的上游同源臂、下游同源臂和启动子基因kasO*P；所述上游同源臂由SEQIDNO.11和SEQIDNO.12所示的引物扩增得到；所述下游同源臂由SEQIDNO.13和SEQIDNO.14所示的引物扩增得到；所述启动子基因kasO*P由SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示的引物扩增得到；5采用重叠PCR方法组装含有上游同源臂、kasO*P和下游同源臂的启动子盒，然后通过同源重组融合方法将其构建于步骤3的含有特异性sg-RNA序列的基因组编辑载体中。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 陕西师范大学 CRISPR/Cas9介导的附加内源RBS的微生物次级代谢产物强化启动系统
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