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申请/专利权人：江苏省农业科学院

摘要：本发明公开了一种高光泽抗TYLCV樱桃番茄自交系的选育方法。本发明选用品种粉娇与金陵佳玉杂交配组，F2代进行抗TYLCV基因的分子标记辅助选择，获得抗TYLCV基因型为Ty‑2Ty‑2的纯合体种植于田间，后续世代以果实光泽度为主并结合花序长度、果实整齐度等进行选择，至F6代选育出农艺性状稳定一致、果实光泽度高、抗TYLCV的樱桃番茄自交系。本发明为优良番茄自交系的选育提供了一种新的育种途径，利用其可进而培育出高光泽、抗TYLCV的樱桃番茄杂交种，可在育种与生产中推广应用。

主权项：1.一种高光泽抗TYLCV樱桃番茄自交系的选育方法，其特征在于：（1）选用高光泽的、不含Ty-2基因的樱桃番茄品种粉娇为母本，与含有Ty-2基因的、果实光泽黯淡的樱桃番茄品种金陵佳玉为父本杂交配组；（2）种植F1，果实成熟后全部单株混收；（3）F2代进行抗TYLCV分子标记辅助选择和烟粉虱的接种鉴定：利用TYLCV的分子标记引物PCR扩增F2代基因组DNA，扩增后经溴化乙锭染色后观察，选择具有900bp的特征条带的基因纯合体和烟粉虱接种后未发病单株；其中所述的TYLCV的分子标记引物的正向引物T0302-F：SEQIDNO.1，反向引物T0302-R：SEQIDNO.2；（4）将F2代中含有900bp的特征条带的基因纯合体且烟粉虱接种后未发病的单株种植于田间，生长期间选择光泽度高及其他农艺性状优良的单株为F3代，在种植F3、F4、F5过程中，继续单株选择，到F6代时性状基本稳定，再用分子标记和烟粉虱接种鉴定，获得高光泽、抗TYLCV的优良自交系。

全文数据：一种高光泽抗TYLCV樱桃番茄自交系的选育方法技术领域本发明涉及一种高光泽抗TYLCV樱桃番茄自交系的选育方法，属于植物育种技术领域。背景技术樱桃番茄以种植效益高、品质较优而深受种植者和消费者的青睐，种植面积不断增大。但自2005年以来由烟粉虱传播的毁灭性病害-番茄黄化曲叶病毒病在我国大面积发生蔓延，对该病害化学方法根本无法防治，只能通过种植抗病品种才能加以解决，而以往育成的樱桃番茄品种对番茄黄化曲叶病毒病缺乏抗性，致使我国大部分番茄主产区的番茄生产损失惨重，部分地区造成绝产绝收，农民种植番茄的信心大受打击。在此背景下，多家育种单位及公司开展抗TYLCV品种选育研究并育成了相应品种，解决了番茄黄花曲叶病难以防治的问题。然而近年来随着人们生活水平的提高，对樱桃番茄品质的要求越来越高。光泽度作为感官品质，是樱桃番茄果实的一个重要性状。高光泽的樱桃番茄由于具有鲜艳和亮丽的外表，深受广大消费者的喜爱，其市场价格比果实表面黯淡的低光泽的樱桃番茄高。而在之前推出的品种多以产量高、抗性强尤其是要抗TYLCV、硬度高为主，而忽视了品种的果实光泽。发明内容本发明提供了一种高光泽、抗TYLCV樱桃番茄自交系选育的方法，采用高效转育和快速准确鉴定果实表面光泽度的方法，聚合优质、抗病于一体，是本发明的宗旨。本发明的技术方案是通过以下措施来实现的：一种高光泽抗TYLCV樱桃番茄自交系的选育方法，包括如下步骤：1选用高光泽的、不含Ty-2基因的樱桃番茄品种为母本，与含有Ty-2基因的、果实光泽黯淡的樱桃番茄品种为父本杂交配组；2种植F1，果实成熟后全部单株混收；3F2代进行抗TYLCV分子标记辅助选择和烟粉虱的接种鉴定：利用TYLCV的分子标记引物PCR扩增F2代基因组DNA，扩增后经溴化乙锭染色后观察，选择具有900bp的特征条带的基因纯合体和烟粉虱接种后未发病单株；其中所述的TYLCV的分子标记引物的正向引物T0302-F：SEQIDNO.1，反向引物T0302-R：SEQIDNO.2；4将F2代中含有900bp的特征条带的基因纯合体且烟粉虱接种后未发病的单株种植于田间，生长期间选择光泽度高及花序较长、同一花序果实大小整齐、萼片较长等农艺性状优良的单株为F3代，在种植F3、F4、F5过程中，继续单株选择，到F6代时性状基本稳定，再用分子标记和烟粉虱接种鉴定，获得高光泽、抗TYLCV的优良自交系。作为本发明所述的选育方法的一种优选，步骤1中选择高光泽的、不含Ty-2基因的收集自海南的樱桃番茄品种粉娇为母本；选择含有Ty-2基因的、果实光泽黯淡的樱桃番茄品种金陵佳玉为父本。作为本发明所述的选育方法的一种优选，烟粉虱接种鉴定时番茄苗龄为4叶1心期。作为本发明所述的选育方法的另一种优选，番茄果实光泽度高低的判断，先采用肉眼观察选择光泽度较高的单株，然后用色差仪测定，选用的色差仪型号为CM700D，测定参数为8度角光泽值，即G值。色差仪测定果实光泽度时每株番茄测同一成熟度的果实6-8个，每个果实测定5个值，当G值大于35时认为是高光泽。本发明所述的烟粉虱为仅携带TYLCV病毒的烟粉虱。有益效果：本发明提供的一种高光泽、抗TYLCV樱桃番茄自交系选育的方法，具有以下优点：1利用与Ty-2基因紧密连锁的标记进行TYLCV分子标记辅助选择，加速对含有Ty-2基因显性基因的番茄材料选育进程；2利用色差仪快速准确鉴定果实表面光泽度，避免了肉眼观察而存在的个人主观性较强、误差较大、不同测量人员得出的结果不同及肉眼观察容易产生视觉疲劳等问题。3本发明的自交系应用于品种选育，可降低生产过程中化学农药的施用，减轻病害的传播，同时提高番茄果实的感官品质，更易受到广大消费者的喜爱，保障番茄生产的顺利开展，提高番茄产业的经济效益。附图说明：图1Ty-2基因分子标记在F2群体单株的扩增图谱；其中M：DL2000DNAmarker；F2单株；由粉娇×金陵佳玉的F1自交获得的任意24株F2单株；具体实施方式下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作详细描述。以下实施例仅用于说明本发明，但不能用来限制本发明的范围。实施例11.选用高光泽的、不含Ty-2基因的收集自海南的樱桃番茄品种粉娇市售品种为母本，与含有Ty-2基因的、果实光泽黯淡的自主选育的品种金陵佳玉品种权号为CNA20120957.5为父本杂交配组。Ty-2基因为显性基因。2.种植F1，果实成熟后全部单株混收留种，得到F2代；3.分子标记辅助选择和烟粉虱接种鉴定1Ty-2标记检测：1DNA的提取：苗期各单株DNA采用Karroten植物基因组DNA提取试剂盒来提取。2利用PCR标记引物为：正向引物T0302-F5’-TGGCTCATCCTGAAGCTGATAGCGC-3’SEQIDNO.1反向引物T0302-R5’-AGTGTACATCCTTGCCATTGACT-3’SEQIDNO.23反应体系和扩增程序PCR反应体系为：反应体系共10μL，10ngμL模板DNA1.0μL；4pmmolL分子标记引物1.0μL、10×PCRBuffer1.0μL、25mmolLMgCl20.8μL、10mmolLdNTPs0.4μL、5UμLTaq酶0.1μL、ddH2O5.7μL；PCR反应扩增程序为：94℃变性4min；每个循环94℃变性30s，55℃退火1min，72℃延伸1.5min，共35个循环，最后72℃延伸10min。扩增后，经溴化乙锭染色后观察，记录实验结果。2抗病性鉴定：将4叶1心的F2群体单株幼苗带到人工气候室，进行带TYLCV烟粉虱的人工接种，接种7d后喷施杀虫剂杀死幼苗上的烟粉虱，之后将接种后的番茄幼苗定植于田间；定植4周后调查植株发病情况，按照发病严重程度分为0-4级：0级，无任何感病症状；1级，顶端叶边缘轻微黄化；2级，顶端小叶稍微变黄并发生很小的卷曲；3级，大范围的叶片黄化、卷曲，植株生长量小；4级，叶片严重黄化、卷曲，植株矮化，停止生长。4.F2代播种育苗5000株按照上述方法进行Ty-2分子标记筛选，将F2代中含有900bp的特征条带的基因纯合体且烟粉虱接种后未发病的单株种植于田间，生长期间用肉眼观察和色差仪测定的方法选择光泽度高及其他农艺性状优良的单株为F3代。1高光泽测定方法番茄果实光泽度高低的判断，先采用肉眼观察选择光泽度较高的单株，然后用色差仪测定，选用的色差仪型号为CM700DKonicaMinolta，东京，日本，测定参数为8度角光泽值，即G值；色差仪测定果实光泽度时每个单株测同一成熟度的果实6-8个，测定时使果实表面覆盖住测量口，不留肉眼可见的缝隙，不施加外界压力，使果实自然置于测量口。然后手动操作进行测量，每个果实取赤道面5个点进行测定，当G值大于35时认为是高光泽。5.种植F3代500株，按照上述标准，选择G值大于35的F3代单株留种为F4代，F4代种植300株，选择G值大于35的F4代单株留种为F5代，F5代种植200株，选择G值大于35的F5代单株留种为F6代，F6代种植100株，此时性状基本稳定，再用分子标记和烟粉虱接种鉴定，获得高光泽度、抗TYLCV的优良自交系JS-FJ18-3，该自交系无限生长、中早熟、长势强、单果重16g-20g、果实短椭圆形、成熟果粉红色、果实硬度较高，果实平均G值为35.5-41.3，含有基因纯合体Ty-2。序列表110江苏省农业科学院120一种高光泽抗TYLCV樱桃番茄自交系的选育方法1602170SIPOSequenceListing1.0210121125212DNA213人工序列ArtificialSequence4001tggctcatcctgaagctgatagcgc25210221123212DNA213人工序列ArtificialSequence4002agtgtacatccttgccattgact23

权利要求：1.一种高光泽抗TYLCV樱桃番茄自交系的选育方法，其特征在于：1选用高光泽的、不含Ty-2基因的樱桃番茄品种为母本，与含有Ty-2基因的、果实光泽黯淡的樱桃番茄品种为父本杂交配组；2种植F1，果实成熟后全部单株混收；3F2代进行抗TYLCV分子标记辅助选择和烟粉虱的接种鉴定：利用TYLCV的分子标记引物PCR扩增F2代基因组DNA，扩增后经溴化乙锭染色后观察，选择具有900bp的特征条带的基因纯合体和烟粉虱接种后未发病单株；其中所述的TYLCV的分子标记引物的正向引物T0302-F：SEQIDNO.1，反向引物T0302-R：SEQIDNO.2；4将F2代中含有900bp的特征条带的基因纯合体且烟粉虱接种后未发病的单株种植于田间，生长期间选择光泽度高及其他农艺性状优良的单株为F3代，在种植F3、F4、F5过程中，继续单株选择，到F6代时性状基本稳定，再用分子标记和烟粉虱接种鉴定，获得高光泽、抗TYLCV的优良自交系。2.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于：步骤1中选择高光泽的、不含Ty-2基因的收集自海南的樱桃番茄品种粉娇为母本。3.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于：步骤1中选择含有Ty-2基因的、果实光泽黯淡的樱桃番茄品种金陵佳玉为父本。4.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于：烟粉虱接种鉴定时番茄苗龄为4叶1心期。5.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于：番茄果实光泽度高低的判断，先采用肉眼观察选择光泽度较高的单株，然后用色差仪测定，选用的色差仪型号为CM700D，测定参数为8度角光泽值，即G值。6.根据权利要求5所述的选育方法，其特征在于：色差仪测定果实光泽度时每株番茄测同一成熟度的果实6-8个，每个果实测定5个值，当G值大于35时认为是高光泽。

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